[发明专利]方法、自我复制载体、测定试剂盒及分析装置

摘要

本发明由实施方式提供得到细胞的表观遗传的信息的方法。此方法包括，将报告子核酸构建体导入被检细胞的核内，使报告子核酸构建体自我复制，检测在被检细胞中发生的信号的有无及/或大小，基于得到的结果，得到被检细胞的表观遗传的信息。报告子核酸构建体特征在于将被检细胞的基因组上的特定的序列中的修饰的状态抄录到被检细胞的在核内的自我复制中由官能团的取代对应的其序列上，依赖于抄录的官能团的存在状况发生可检测的信号。

主权项

1.得到细胞的表观遗传的信息的方法，其中将被检细胞的基因组上的待观察的特定的序列中的修饰的状态抄录到在上述被检细胞的核内的自我复制中由官能团的取代而对应的其序列上，使用依赖于所述抄录的官能团的存在状况发生可检测的信号的自我复制载体得到细胞的表观遗传的信息，其中，上述自我复制载体是含下列(a)～(c)的自我复制载体：(a)含下列序列的第1报告子基因表达单位：含甲基可被取代的碱基，有依赖于上述碱基中的所述甲基的取代的程度的启动子活性，并且对于被检细胞的基因组上的待观察的特定的序列有相同性的目标核酸序列，在上述目标核酸序列的下游功能性地连接，由上述目标核酸序列的活化而表达的编码报告子蛋白质的报告子基因，在上述报告子基因的下游功能性地连接的转录终止信号序列，(b)在上述第1报告子基因表达单位的下游连接的含下列序列的第2报告子基因表达单位：含甲基可被取代的碱基，有依赖于上述碱基中的所述甲基的取代的程度的启动子活性，并且对于被检细胞的基因组上的待观察的特定的序列有相同性的目标核酸序列，在上述目标核酸序列的下游功能性地连接，由上述目标核酸序列的活化而表达的编码报告子蛋白质的报告子基因，在上述报告子基因的下游功能性地连接的转录终止信号序列，及(c)与上述第1及第2报告子基因表达单位存在于相同核酸上的复制起始序列，上述自我复制载体的上述第1报告子基因表达单位及上述第2报告子基因表达单位各自所含的上述目标核酸的甲基化状态互相不同，所述方法包括：(1)向被检细胞导入上述自我复制载体，(2)通过在复制起始蛋白质表达的条件下培养上述被检细胞，使上述自我复制载体复制，(3)检测各自来源于所述第1报告子基因表达单位及所述第2报告子基因表达单位的第1报告子蛋白质及第2报告子蛋白质及/或测定其表达量，(4)比较上述(3)中得到的上述第1报告子蛋白质和上述第2报告子蛋白质的表达量，得到关于在所述被检细胞的基因组上的特定的序列中所含的核酸的甲基的取代的信息。