[发明专利]用于确定神经毒素多肽在细胞中的生物活性的工具和方法

摘要

本发明涉及用于确定梭菌神经毒素的生物活性的方法和试剂盒。本发明的方法允许直接确定神经毒素多肽在细胞中的生物活性。将对神经毒素敏感的细胞，例如神经细胞与神经毒素(例如BoTN/A)孵育，然后固定，并使用特异结合切割的神经毒素(例如SNAP‑25)的抗体和结合切割的和未切割的神经毒素两者的抗体染色，用于确定细胞中神经毒素底物的总的量和含量。所述神经毒素多肽的生物活性在细胞中直接确定，并且通过检测两种复合体的方式计算。

主权项

用于直接确定神经毒素多肽在细胞中的生物活性的方法，所述方法包括以下步骤：a)将对神经毒素中毒敏感的细胞与神经毒素多肽在允许所述神经毒素多肽发挥其生物活性的条件下孵育一段时间；b)固定所述细胞并且，任选地，用去垢剂对所述细胞进行可渗透化处理；c)将所述细胞与特异结合未切割的和神经毒素多肽切割的底物的至少第一捕获抗体并且与特异结合所述神经毒素多肽切割的底物的切割位点的至少第二捕获抗体，在允许所述捕获抗体结合所述底物的条件下相接触；d)将所述细胞与特异结合所述第一捕获抗体的至少第一检测抗体在允许所述第一检测抗体结合所述第一捕获抗体的条件下相接触，从而形成第一检测复合体，并且与特异结合所述第二捕获抗体的至少第二检测抗体在允许所述第二检测抗体结合所述第二捕获抗体的条件下相接触，从而形成第二检测复合体，其中所述第一检测抗体和所述第二检测抗体携带可检测标记物；e)确定步骤d)的所述第一和第二检测复合体的量；和f)通过所述第二检测复合体计算所述细胞中由所述神经毒素多肽切割的底物的量，从而确定所述神经毒素多肽在所述细胞中的生物活性。