[发明专利]用于大量生产人凝血因子VII衍生物的方法在审
| 申请号： | 201480058873.6 | 申请日： | 2014-08-27 |
| 公开（公告）号： | CN105745325A | 公开（公告）日： | 2016-07-06 |
| 发明（设计）人： | 康喜哲;金真荣;李炳善;金贤煜;崔仁荣;权世昌 | 申请（专利权）人： | 韩美药品株式会社 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/12;C12P21/02 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 王永伟;颜芳 |
| 地址： | 韩国，*** | 国省代码： | 韩国;KR |
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| 摘要： | 本发明提供用于大量生产人凝血因子VII衍生物的方法，所述方法包括如下步骤：a)构建表达载体，所述表达载体包括i)其GC富集区缺少至少一个CCGCCC重复序列的二氢叶酸还原酶启动子的核苷酸序列、和与其可操作地连接的编码二氢叶酸还原酶(DHFR)的核苷酸序列，和ii)巨细胞病毒(CMV)的早期基因启动子的核苷酸序列、和与其可操作地连接的编码人凝血因子VII衍生物的核苷酸序列；b)用步骤a)的表达载体转染动物细胞系；c)通过在存在二氢叶酸还原酶抑制剂的情况下培养步骤b)的转染的动物细胞系，以选择能够高效表达人凝血因子VII衍生物的细胞系；和d)通过添加选自丁酸钠、维生素K和培养基添加剂的至少一种，培养从步骤c)选择的动物细胞系。本发明通过利用含有缺少GC富集重复序列的DHFR启动子的载体，可大规模高效表达人凝血因子VII衍生物，并因此可有效用于制备血友病治疗剂。 | ||
| 搜索关键词： | 用于 大量生产 凝血 因子 vii 衍生物 方法 | ||
【主权项】：
用于大量生产人凝血因子VII衍生物的方法，包括：a)构建表达载体，所述表达载体包括i)其GC富集区缺少至少一个CCGCCC重复序列的二氢叶酸还原酶启动子的核苷酸序列、和与其可操作地连接的编码二氢叶酸还原酶(DHFR)的核苷酸序列，和ii)巨细胞病毒(CMV)早期基因启动子的核苷酸序列、和与其可操作地连接的编码人凝血因子VII衍生物的核苷酸序列；b)用步骤a)的表达载体转染动物细胞系；c)在二氢叶酸还原酶抑制剂存在的情况下培养步骤b)的转染动物细胞系，以选择能够高效表达人凝血因子VII衍生物的细胞系；和d)通过添加选自丁酸钠、维生素K和培养基附加剂的至少一种，培养从步骤c)选择的动物细胞系。
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