[发明专利]一种制备嗜热脂肪芽孢杆菌的芽孢的方法

摘要

本发明公开了一种制备嗜热脂肪芽孢杆菌的芽孢的方法，包括步骤菌种活化、菌体增殖、菌体筛选和芽孢诱导；其中，在菌体筛选时在培养基表面覆盖有1～5张无菌滤纸，在芽孢诱导时在培养基中加入5～10重量份的PEG6000。本发明通过改进培养基的配方及培养条件，可在短时间内大批量制备芽孢，且培养基成分廉价易得，工艺条件简单、生产周期短，整个制备工艺一个批次耗时在90小时内，本案提供了一种简单的培养方法和工业化发酵培养的路线，它诱导生产的芽孢纯度高，含量可达1×109个/mL，芽孢转化率大于98％。

主权项

一种制备嗜热脂肪芽孢杆菌的芽孢的方法，包括以下步骤：步骤1)菌种活化：以嗜热脂肪芽孢杆菌为菌种，将菌种接种于活化培养基表面，在50～60℃下培养12～24h后，所述菌种长出菌苔；所述活化培养基由以下重量份的材料组成：10重量份的胰蛋白胨、5重量份的大豆蛋白胨、5重量份的酪蛋白胨、5重量份的氯化钠、15重量份的琼脂和1000重量份的蒸馏水；步骤2)菌体增殖：将含所述菌苔的活化培养基加入到增殖培养基中，在50～60℃环境中，转速100～250rpm条件下培养12h；所述增殖培养基由以下重量份的材料组成：5～10重量份的胰蛋白胨、5～10重量份的大豆蛋白胨、5～10重量份的酪蛋白胨、1～5重量份的氯化钠和1000重量份的蒸馏水；步骤3)菌体筛选：在无菌平皿中加入筛选培养基，并在筛选培养基的表面覆盖无菌滤纸1～5张，将步骤2)所得菌液加到无菌滤纸上，在50～60℃下培养24h；所述筛选培养基由以下重量份的材料组成：1～5重量份的酪蛋白胨、1～5重量份的酵母提取物、1～5重量份的牛肉浸膏、0.01～0.1重量份的KH2PO4、0.1～1重量份的MnSO4·H2O、0.1～1重量份的MgSO4·2H2O、0.01～1重量份的CaCl2·2H2O、10～20重量份的琼脂和1000重量份的蒸馏水；步骤4)芽孢诱导：将步骤3)中的无菌滤纸放入产孢培养基中，在50～60℃环境中，转速100～200rpm条件下培养12h后，改变温度至30～50℃，继续培养12h，得到嗜热脂肪芽孢杆菌的芽孢；所述产孢培养基由以下重量份的材料组成：1～5重量份的酪蛋白胨、1～5重量份的酵母提取物、0.01～0.1重量份的NaCl、0.1～1重量份的MnSO4·H2O、0.1～1重量份的MgSO4·2H2O、0.01～1重量份的CaCl2·2H2O、5～10重量份的PEG6000、0.5～5重量份的琼脂和1000重量份的蒸馏水。