[发明专利]一种三清山耐寒铁皮石斛种苗培育方法

摘要

本发明公开了一种三清山耐寒铁皮石斛种苗培育方法，通过铁皮石斛杂交育种→铁皮石斛群体改良→铁皮石斛优良品系选育→铁皮石斛优良种苗的扩繁，本发明通过采用三清山野生铁皮石斛与霍山米斛杂交后所得后代，运用植物组织细胞培养技术，把群体改良与优良单株的选育、优良新品系的选育与优良种苗的快繁相结合，利用低温诱导，根据耐寒和有效成分含量来筛选出品种，大大加快了新品系的选育速度，且通过形成铁皮石斛优良品种，丰富铁皮石斛种质资源，推动经济发展具有重要的价值。

主权项

一种三清山耐寒铁皮石斛种苗培育方法，通过铁皮石斛杂交育种→铁皮石斛群体改良→铁皮石斛优良品系选育→铁皮石斛优良种苗的扩繁，其特征在于具体步骤如下：I：铁皮石斛杂交育种i.收集三清山野生铁皮石斛30份种质，同时收集霍山米斛30份种质；ii.以三清山野生铁皮石斛粗壮植株为母本，以霍山米斛粗壮植株为父本，进行杂交，得到蒴果，经对所收集铁皮石斛种质进行培育，经植株间比较，选出整体表现较好、有效成分含量高的植株作为新的母本和父本进行杂交，选择整体表现较好的标准为：株高、茎秆形状和粗壮度、节间纵纹颜色、叶片颜色这类外观指标；有效成分含量的标准是：含铁皮石斛多糖即以含葡萄糖计不得少于25.0％，含甘露糖为13.0‑38.0％；所述杂交是指在花期采用人工授粉的形式进行；II：铁皮石斛群体改良i.将I(i)得到的蒴果播种在植物组织细胞培养基上萌发、培养，得到铁皮石斛植株，即为基础群体，铁皮石斛蒴果的标准为10‑11月份选取外表发黄但未开裂、饱满的蒴果，操作方法为：把果实放入干净的消毒容器中，加入75％酒精浸泡消毒果实，30秒后，将酒精倒出，再加入0.1％生汞进行果实表面消毒，轻摇容器，使果实灭菌彻底，然后倒出生汞液体，再用无菌水冲洗4～5次；采用MS培养基+香蕉汁30g/L+0.5mg/L NAA+白糖30g/L+花宝3g/L为基质，培养温度30±2℃，相对湿度60～80％，每天光照8～12h，光照强度1000～2000LX；待种子萌发后，再转接至1/2MS+香蕉汁30g/L+白糖30g/L+花宝3g/L培养基上进行原球茎诱导增殖，然后转接至MS+土豆汁30g/L+白糖30g/L+花宝3g/L+NAA 0.2mg/L的培养基上进行分化成苗，最后转接至MS+0.2mg/L NAA+30g/L土豆汁的培养基上进行壮苗生根，经炼苗后作为大田用苗使用；ii.将基础群体置入人工模拟气候箱中进行培养，调节温度控制，使气候箱中的温度每天从0℃上升至30℃，且0℃应保持2小时，根据基础群体在人工气候箱中的长势和有效成分含量由高到低的顺序选出优良单株50个；iii.以ii中选出的优良单株50个的内含种子的蒴果进行植物组织细胞培养扩繁，获得50个单株的优良后代个体，进行扩繁所用的培养基与培养条件同ii；iv.选择玉山、德兴、婺源3个环绕三清山的种植区进行铁皮石斛单株优良后代的比较试验，根据试验结果，从50个后代系中选择出整体表现较好、有效成分含量高的优良后代20个，除去未中选的所有铁皮石斛植株，并将中选的20个优良后代分别疏去部分植株，并进行相间移植，使其获得充分受粉，种子成熟后混收种子，即为改良群体；III：运用植物组织细胞培养技术进行铁皮石斛优良品系选育在群体改良的第四个步骤中，选择所需要的优良个体，并利用植物组织细胞培养技术以内含种子的蒴果为材料对这些个体进行扩繁获得后代，然后选择3个不同种植地区进行耐寒铁皮石斛稳定性试验，选出耐寒且稳定的优良后代培育成新品系；IV.运用植物组织细胞培养技术进行铁皮石斛优良种苗的扩繁运用植物组织细胞培养技术根据II(i)的方法与条件以内含种子的蒴果进行新品系快速繁殖，得到耐寒稳定且有效成分含量测定高的铁皮石斛优良种苗。