[发明专利]一种总胆碱的测定方法

摘要

本发明公开了一种总胆碱的测定方法，包括以下步骤配制试验用缓冲溶液、标准溶液，用分光光度计测定氯化胆碱标准溶液的吸光系数，将样品经预处理后用分光光度计测定吸光系数，并计算出样品中胆碱的含量，其特征在于，样品的预处理包括以下步骤取含有胆碱的饲料样品，粉碎，加入无水乙醇，溶解分散均匀，样品混合均匀后进行水解处理，搅拌使样品分散均匀，水浴加热至50‑80℃，加热时长170‑240分钟；而后振荡均匀，调节pH至弱酸性，并用的弱酸性缓冲液定容；涡旋振荡，离心，取上清液过滤，收集滤液用于测定。用于测定的滤液，加入10‑20倍弱碱性缓冲液所配置的酶反应液，保证用于测试的滤液呈弱碱性，在37℃左右保温反应10‑60分钟，得测试样品溶液并测定。

主权项

一种总胆碱的测定方法，包括以下步骤：（1）配制试验用缓冲溶液：配制弱酸性缓冲液，弱碱性缓冲液和酶反应液；所述弱酸性缓冲液是pH=4‑7的乙酸钠缓冲液，所述弱碱性缓冲液是pH=7‑8的缓冲液，所述酶反应液是混合酶反应液，混合酶反应液至少包含有胆碱氧化酶和磷脂酶D，用上述弱碱性缓冲溶液配制；磷脂酶D的浓度至少为0.7U/mL，胆碱氧化酶至少为0.8U/mL,；（2）配制标准溶液：配制氯化胆碱标准溶液；（3）用分光光度计测定氯化胆碱标准溶液的吸光系数；（4）将样品预处理，然后用分光光度计测定经过预处理的样品的吸光值，并计算出样品中胆碱的含量；可见光分光光度计在400‑450nm波长测试样品的吸光系数；其特征在于：步骤（4）中样品的预处理及测定，包括以下步骤：（4a）取含有胆碱的饲料样品，粉碎至粒度小于0.45mm，加入无水乙醇，溶解分散均匀，样品混合均匀后进行酸碱水解处理样品，搅拌使样品分散均匀，水浴加热至50‑80℃，加热时长170‑240分钟；而后振荡均匀，调节pH至弱酸性，并用步骤（1）中配制的弱酸性缓冲液定容；酸碱水解处理样品时：如果样品为植物性原料则加入酸液，如果样品为动物性原料则加入碱液；所述酸液是有机酸溶液或无机酸溶液；所述碱液是有机碱溶液或无机碱溶液；（4b）加入活性炭吸附脱色，涡旋振荡，离心，取上清液过滤，收集滤液用于测定；（4c）用于测定的滤液，加入10‑20倍体积的酶反应液，保证用于测试的滤液呈弱碱性；在37℃左右保温反应10‑60分钟；以样品空白为参比，在步骤（3）中相同的测试波长下，测试样品溶液的吸光值，并计算胆碱的含量。