[发明专利]一种检测传染性脾肾坏死病毒的抗体及其制备和应用

摘要

本发明公开了一种检测传染性脾肾坏死病毒的抗体及其制备和应用；所述检测传染性脾肾坏死病毒抗体为纯化的兔抗ISKNV‑23P8多克隆抗体，是以含有序列号为SEQ ID NO1的一段氨基酸残基为表位抗原，获得特异性识别ISKNV‑23P8的多克隆抗体。该抗体用于检测传染性脾肾坏死病毒，具有特异性。本发明所述的传染性脾肾坏死病毒免疫荧光检测试剂盒及传染性脾肾坏死病毒感染印片非诊断性的免疫荧光快速检测方法具有特异性好、操作简单、快速、灵敏的特点，较PCR方法有明显优势，全部操作可在1.5小时内完成，可用于各种易感鱼类养殖过程中的ISKNV感染检测。

主权项

一种检测传染性脾肾坏死病毒的抗体，其特征在于，其为兔抗ISKNV‑23P8 多克隆抗体，是以含有序列号为SEQ ID NO：1的一段氨基酸残基为表位抗原，获得特异性识别ISKNV‑23P8的多克隆抗体；所述多克隆抗体通过以下方法制备得到：1）合成多肽：以序列为SEQ ID NO：1的多肽片段为模板，用生物学方法合成多肽，用HPLC对合成的多肽进行纯化，纯度在85%以上；2）耦联：将上述步骤1）合成多肽耦联至钥孔血蓝蛋白中，获得23P8‑KLH复合物；3）乳化：用弗氏完全佐剂对上述步骤2）得到的23P8‑KLH复合物进行乳化；4）免疫：用上述步骤3）的乳剂免疫新西兰大白兔，背部皮下多点注射，首免后10‑15天，用弗氏不完全佐剂乳化的23P8‑KLH进行一次加强免疫；5）血清抗体的检验与制备：加强免疫后7天，用Western‑blotting检测兔血清中特异抗体的生成情况；6）亲和层析：利用ISKNV‑23P8耦联的琼脂糖凝胶对血清中特异抗体进行亲和层析，获得兔抗ISKNV‑23P8 多克隆抗体。