[发明专利]一种好氧合成维生素B12的大肠杆菌及其构建与应用

摘要

本发明公开了一种好氧合成维生素B12的大肠杆菌及其构建与应用，属于代谢工程和微生物发酵领域。本发明大肠杆菌为宿主细胞，使用兼容的表达载体，将来源于类球红细菌和恶臭假单胞菌维生素B12合成途径中大肠杆菌基因组缺失的基因进行模块化组装并表达，构建重组大肠杆菌工程菌株，通过发酵验证，实现了大肠杆菌合成维生素B12。

主权项

一种好氧合成维生素B12的大肠杆菌工程菌株，其特征在于，是在大肠杆菌中采用不同拷贝数的载体模块化组装表达来源于类球红细菌和恶臭假单胞菌的维生素B12合成途径的基因，构建以葡萄糖为底物好氧合成维生素B12的途径；所述维生素B12合成途径的基因包括cobA、cobI、cobG、cobJ、cobM、cobF、cobK、cobL、cobH、cobB、cobN、cobS、cobT、cobR、cobO、cobQ、cobC及cobD；所述cobA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，cobI的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，cobG的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，cobJ的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，cobM的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，cobF的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，cobK的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，cobL的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，cobH的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，cobB的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示，cobN的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示，cobS的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示，cobT的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示，cobR的核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示，cobO的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示，cobQ的核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示，cobC的核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示，cobD的核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示；以pACYCDuet‑1表达cobA、cobI、cobG、cobJ和cobM，pCDFDuet‑1表达cobF、cobK、cobL、cobH和cobB，pETDuet‑1表达cobN、cobS和cobT，pRSFDuet‑1表达cobR、cobO、cobQ、cobC和cobD。