[发明专利]一种抗癌药物的筛选方法

摘要

本发明公开了一种抗癌药物的筛选方法，包括：合成寡核苷酸链偶联抗体的探针、细胞培养及药物处理、利用原位邻位连接技术在细胞水平检测Hsp90和Cdc37的相互作用以及数据分析处理。这种高通量的药物筛选方法能够在单细胞水平准确定位和定量Hsp90和Cdc37的相互作用，在抗癌药物制备方面具备广阔前景。

主权项

一种抗癌药物的筛选方法，其特征在于，该方法的具体步骤如下：将抗小鼠IgG抗体和抗兔IgG抗体的N端修饰NHS基团后，分别与5′端修饰有叠氮基团的单链Arm1 （SEQ ID NO:1）、Arm 2（SEQ ID NO:2）偶联，形成探针1、探针2；培养Panc1胰腺癌细胞株，将待筛选的药物分别加入已贴壁的细胞培养容器中，形成不同药物处理实验组，并设置没有加任何药物的对照组；药物作用结束后，加入特异性针对Hsp90的兔抗以及特异性针对Cdc37的鼠抗，后加入步骤中制备的探针1和探针2与上述兔抗和鼠抗进行反应；反应结束后，加入长单链连接DNA(SEQ ID NO:3)和短单链连接DNA(SEQ ID NO:4)，连接反应缓冲液以及T4连接酶进行连接反应，然后加入DNA聚合酶及反应缓冲液，进行滚环复制反应，结束后加入荧光检测单链DNA(SEQ ID NO:5)以及细胞核染料，通过DNA杂交使单荧光信号堆积，最后在普通荧光显微镜下观察；以对照组为参照，筛选出荧光信号减少的实验组，该组别所加药物即为所需抗癌药物。