[发明专利]制备和筛选表达双特异性抗体细胞株的方法在审
| 申请号： | 201510055737.8 | 申请日： | 2015-02-03 |
| 公开（公告）号： | CN104818295A | 公开（公告）日： | 2015-08-05 |
| 发明（设计）人： | 张敬;刘晓燕;范克索;周鹏飞 | 申请（专利权）人： | 武汉友芝友生物制药有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/13;C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京高文律师事务所 11359 | 代理人： | 程义贵 |
| 地址： | 430075 湖北省武汉市中国武汉*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提供一种制备和筛选表达双特异性抗体细胞株的方法，所述方法包括构建表达双特异性抗体的两个质粒，两个质粒都含双启动子，分别表达一种不同的荧光蛋白；将两种重组质粒进行转化、培养和提取，两种重组质粒共转染至宿主细胞中，筛选表达双荧光的阳性单克隆细胞株，并根据荧光强度评估产量和稳定性。本发明的方法能够方便快捷、提前筛选出高产细胞株，它不仅能够缩短试验周期，并且可以减少人力物力的投入，准确性高。 | ||
| 搜索关键词： | 制备 筛选 表达 特异性 抗体 细胞株 方法 | ||
【主权项】：
制备和筛选表达双特异性抗体细胞株的方法，其特征在于包括以下步骤：步骤1：构建表达双特异性抗体的两个质粒，所述两个质粒都含双启动子，其中一个质粒表达的蛋白为特异结合肿瘤抗原的一条或两条多肽；另一个质粒表达的蛋白为特异结合免疫活性细胞抗原的一条或两条多肽；所述两个含双启动子的质粒还分别表达一种不同的荧光蛋白；若质粒表达的蛋白是两条多肽形式，则荧光蛋白利用内部核糖体进入位序列连接在一条多肽的C端，若是一条多肽形式，则荧光蛋白直接插入到载体的另一个启动子下游多克隆位点；步骤2：将步骤1中得到的两种重组质粒进行转化、培养和提取；步骤3：将步骤2中提取的两种重组质粒共转染至宿主细胞中；步骤4：筛选表达双荧光的阳性单克隆细胞株。
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