[发明专利]一株产乙基长春胺的夹竹桃科内生真菌CH1及其应用

摘要

本发明涉及微生物技术领域，特别涉及一株产乙基长春胺夹竹桃科内生真菌及其代谢产物的应用。该内生真菌的培养及其代谢产物的提取方法主要包括如下步骤：取新鲜的夹竹桃根茎，培养发酵，进行菌株的分离，挑取少量菌丝液体发酵培养得到次级代谢产物，过滤，萃取，可得到乙基长春胺等长春胺类化合物。本发明从夹竹桃树皮中分离筛选出一株产乙基长春胺内生真菌CH1，这为产乙基长春胺提供了一种新的研究思路；提供了利用内生真菌发酵获得定向活性代谢产物的方法；为生产长春胺类生物碱开发增添了新的途径，有利于实现自动化，工业化生产。

主权项

一株产乙基长春胺夹竹桃科内生真菌，其特征在于：包括如下步骤：(1)菌种分离与活化：取新鲜的夹竹桃植物的皮质部：将经过预处理的植物组织在无菌条件下切成1cmx1cm小块，转接在制备好的分离培养基上，于27℃倒置培养至菌丝覆盖培养皿，待组织块周围长出菌丝后挑取尖端部分，继续接种培养。取实验室保存的夹竹桃科内生真菌菌种，在洁净工作台处操作，用接种针挑取少量菌丝，接入已灭菌的固体培养基，于27±2℃倒置培养至菌丝覆盖培养皿；培养基组成成分为；土豆：10～20％、葡萄糖：1％～5％、蔗糖1％～5％、MgSO41‰～5‰，牛肉膏1％～5％，氨基酸1‰～5‰。(2)发酵培养：取活化培养后的菌种，在无菌条件下，转接入已灭菌的液体种子培养基中，27±2℃下摇床培养，得种子发酵液；无菌条件下，按照10％的接种量接种于灭菌处理过的液体培养基中，27±2℃下间歇性震荡培养6～8天；(3)产物处理：发酵完毕，超声处理30～45min；过滤，菌液减压蒸干至100～150ml，有机溶剂萃取，菌丝干燥后粉碎，有机溶剂萃取，合并有机相，减压浓缩可得乙基长春胺、长春新碱等长春胺类化合物。