[发明专利]一种猪胎儿成纤维细胞的单细胞培养方法有效
| 申请号： | 201510098217.5 | 申请日： | 2015-03-05 |
| 公开（公告）号： | CN104830752B | 公开（公告）日： | 2018-05-22 |
| 发明（设计）人： | 李秋艳;张佳;李志远;付怡静 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/073 | 分类号： | C12N5/073;C12N5/02 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 赵青朵 |
| 地址： | 北京市*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及细胞培养技术领域，特别涉及一种猪胎儿成纤维细胞的单细胞培养方法。该单细胞培养方法，包括：步骤A：获得成纤维细胞悬液和饲养层细胞；步骤B：将饲养层细胞以微滴形式接种至培养皿，培养至饲养层细胞密度在微滴内100％汇合，获得饲养层细胞微滴；步骤C：将成纤维细胞悬液接种至具有饲养层细胞微滴的培养皿，经细胞培养，获得单细胞克隆。本发明提供的单细胞培养方法获得的克隆细胞基因组完全一致，有利于提高转基因猪的特异性，有利于转基因猪克隆效率的评价，以及特定均一转基因猪品系的建立。 | ||
| 搜索关键词： | 种猪 胎儿 纤维 细胞 单细胞 培养 方法 | ||
【主权项】：
1.一种猪胚胎成纤维细胞的单细胞培养方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤A：获得猪胚胎成纤维细胞悬液和饲养层细胞；所述猪胚胎成纤维细胞悬液中猪胚胎成纤维细胞的浓度为5~10个/mL；步骤B：将所述饲养层细胞以微滴形式接种至培养皿，培养至饲养层细胞密度在微滴内100%汇合，获得饲养层细胞微滴；步骤C：将所述成纤维细胞悬液接种至具有所述饲养层细胞微滴的培养皿，经细胞培养，获得单细胞克隆；所述成纤维细胞悬液的接种量为10~15mL/皿；所述细胞培养为38℃、5%CO2 恒温培养8~11天。
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