[发明专利]一种选择性扩增RNA的方法在审
申请号: | 201510102011.5 | 申请日: | 2015-03-09 |
公开(公告)号: | CN104673786A | 公开(公告)日: | 2015-06-03 |
发明(设计)人: | 邓亚光;邓伟平 | 申请(专利权)人: | 武汉格蓝丽富科技有限公司 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10 |
代理公司: | 北京华沛德权律师事务所 11302 | 代理人: | 刘杰 |
地址: | 430075 湖北省武*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | 本发明公开了一种选择性扩增RNA的方法,属于生物技术和医学领域。方法原则上按需求可以只扩增样本中的RNA,不扩增DNA。整个操作过程完全可以在同一个试管内进行,通过cDNA合成探针和cDNA扩增探针的相似率设计调整,扩增反应是可以在不同的恒温下进行,属于线性扩增原理,扩增的产物是cDNA(单链或双链),可直接用于PCR,定量PCR或各种芯片的基因分析。由于使用的RNA样本量少,扩增效率高,大大地减少了样本中的DNA对基因表达结果分析的影响,是小量RNA样本或少量细胞甚至单细胞的基因功能分析和细胞鉴定的好方法。 | ||
搜索关键词: | 一种 选择性 扩增 rna 方法 | ||
【主权项】:
一种选择性扩增RNA的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)由cDNA合成探针结合到RNA模板上,在有RNA转录酶的条件下,合成第一链cDNA;(2)在有RNA酶的条件下,对结合的RNA进行切割;(3)在有DNA合成酶的条件下,合成第二链cDNA;(4)在RNA转录酶存在的条件下,合成cDNA合成探针中RNA部分的cDNA;(5)在RNA酶存在的条件下,酶切结合的cDNA合成探针的RNA部分;(6)在cDNA扩增探针存在的条件下,cDNA扩增探针结合到空出的部位,在DNA合成酶(DNAPolymerase)的作用下,扩增cDNA产物;(7)通过改变cDNA扩增探针和cDNA合成探针的核苷酸的相同序列程度,可调式cDNA扩增的温度条件。
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