[发明专利]通用型基因打靶载体有效
| 申请号： | 201510118781.9 | 申请日： | 2015-03-18 |
| 公开（公告）号： | CN104651402B | 公开（公告）日： | 2021-05-14 |
| 发明（设计）人： | 毕延震;郑新民;华再东;任红艳;张立苹;刘西梅;华文君;李莉;肖红卫;魏庆信 | 申请（专利权）人： | 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85 |
| 代理公司： | 北京化育知识产权代理有限公司 11833 | 代理人： | 尹均利 |
| 地址： | 430064 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种通用型基因打靶载体，属于生物工程领域。该通用型基因打靶载体使用新霉素磷酸转移酶和EGFP为正选择标记，DsRed为负选择标记；正选择标记基因表达框的两侧各含有1个同向排列的LoxP位点；在LoxP位点附近各含有一段由稀有限制性内切酶位点组成的多克隆位点，便于基因打靶臂的克隆。该载体含有2个归巢限制性内切酶位点，分别为I‑CeuI和I‑SceI，可作为通用酶切位点将该载体线性化。本发明提供的通用型基因打靶载体，不仅具备单药物和双荧光筛选功能，而且其含有的LoxP位点可介导选择标记的高效删除反应，这为动物安全转基因技术提供了新材料，具有重要的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 通用型 基因 打靶 载体 | ||
【主权项】：
一种通用型基因打靶载体，其特征在于，包含正选择标记和负选择标记，使用新霉素磷酸转移酶和EGFP为正选择标记，DsRed为负选择标记；靠正选择标记表达框的5′和3′端分别含有一个同向排列的LoxP位点，可在Cre/LoxP重组酶系统的作用下删除正选择标记表达框；在5′LoxP位点的上游和3′LoxP位点的下游各含有一段具有稀有限制性内切酶位点的多克隆位点，便于基因打靶臂的克隆；该载体还含有2个归巢限制性内切酶位点，分别为I‑CeuI和I‑SceI，可作为通用酶切位点将该载体线性化。
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