[发明专利]一种同时检测CSFV、PRRSV、PRV、PCV2的四色荧光定量PCR方法及其试剂盒

摘要

本发明公开了一种同时检测CSFV、PRRSV、PRV、PCV2的四色荧光定量PCR方法及其试剂盒；该检测方法可以实现在同一个待测样本中同时检测猪瘟病毒、高致病性猪蓝耳病病毒、伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型的存在，并能对每种病毒的负载水平进行定量。本发明还提供了一种用于猪瘟病毒、高致病性猪蓝耳病病毒、伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型四色荧光定量PCR联合检测的试剂盒。本发明的检测方法及试剂盒操作简便快速，特异性高，检测效果敏感、可靠，最低检测浓度为1×10²拷贝/μl。

主权项

一种同时检测猪瘟病毒、高致病性猪蓝耳病病毒、伪狂犬病毒和猪圆环病毒2型的四色荧光定量PCR联合检测试剂盒，包括如下成分：多色荧光定量PCR MIX、核酸提取液、反转录酶系、Taq酶系、阳性质控品和阴性质控品，其特征在于：所述多色荧光定量PCR MIX中含有同时检测猪瘟病毒、高致病性猪蓝耳病病毒、伪狂犬病毒和猪圆环病毒2型的特异性引物及探针，序列分别为：猪瘟病毒上游引物：CSFV‑F：5’‑CAGTAGTTCGACGTGAGCAGAAG‑3’（SEQ ID NO.1）；下游引物：CSFV‑R：5’‑CGCTAGGGTTAAGGTGTGTCTTG‑3’（SEQ ID NO.2）；荧光探针：CSFV‑P：5’‑FAM‑ACCTCGAGATGCTACGTGGACGA‑BHQ1‑3’（SEQ ID NO.3）；高致病性猪蓝耳病病毒上游引物：PRRSV‑MF：5’‑ AGCTGATGACACCTTTGAGTGAGT‑3’（SEQ ID NO.4）；下游引物：PRRSV‑MR：5’‑ GACAAATCCAGAGGCTCATCCT‑3’（SEQ ID NO.5），荧光探针：PRRSV‑MP：5’‑VIC‑ AGAACTGTGACAACAACGCTGACGCAC–BHQ1‑3’（SEQ ID NO.6）； 伪狂犬病毒上游引物：PRV‑F：5’‑CCATGTGTGCCACTAGCATT‑3’（SEQ ID NO.7）；下游引物：PRV‑R：5’‑CCCCATCGCGGTTTTAA‑3’（SEQ ID NO.8）；荧光探针：PRV‑P：5’‑CY5‑TTCCTGATTCACGCCCACG‑ BHQ2‑3’（SEQ ID NO.9）；猪圆环病毒2型上游引物：PCV2‑MF：5’‑ ATAATCAAAAAGGGAGATTGGAAGCT‑3’（SEQ ID NO.10）；下游引物：PCV2‑MR：5’‑GGTGGGTGTTCACGCTGAA‑3’（SEQ ID NO.11）；荧光探针：PCV2‑MP：5’‑ROX‑ CCGTATTTTCTTGCGCTCGTCTTCGG‑BHQ3‑3’（SEQ ID NO.12）。