[发明专利]一种基于黄杆菌产维生素K2的生产工艺

摘要

本发明公开了一种基于黄杆菌产维生素K2的生产工艺,在发酵培养液中接入二级种子培养液，同时向发酵液中添加一定浓度的表面活性剂，促使维生素K2从胞内渗漏到胞外，解除胞内代谢产物的抑制作用。本发明相比现有技术具有以下优点：本发明的一种基于黄杆菌产维生素K2的生产工艺使维生素K2的发酵单位提高了200-260％，为维生素K2的大规模工业化发酵提供一种可行的发酵策略。

主权项

一种基于黄杆菌产维生素K2的生产工艺，其特征在于，包括如下步骤：(1)、一级培养：取黄杆菌试管斜面一环，接种于一级种子培养基中培养12‑24h，该一级种子培养基的组成为：麦芽糖20‑30g/L、牛肉膏10‑20g/、L、K2HPO4 4‑5g/L、NaCl 3‑4g/L、MgSO4·7H2O 0.3‑0.5g/L，且该一级种子培养基的pH为7.0；(2)、二级培养：取步骤(1)的一级种子瓶培养液，按3‑8％接种量接种于二级种子培养基中培养24‑36h，该二级种子培养基的组成为：麦芽糖10‑20g/L、酵母浸膏5‑15g/L、K2HPO4 2‑4g/L、NaCl 2‑3g/L、MgSO4·7H2O 0.2‑0.4g/L、且该二级种子培养基的pH为7.0；(3)、发酵培养：取步骤(2)中的二级种子瓶培养液，按5‑10％接种量接种于500ml摇瓶或3.7L‑30L发酵罐中，培养8‑48h后，添加0.005‑5％表面活性剂继续发酵培养120‑200h；(4)、胞内产物提取：将步骤(3)得到的发酵液离心弃上清，菌体真空冷冻干燥后，加入甲醇萃取，采用高效液相色谱法分析测定；(5)、胞外产物提取：将步骤(3)得到的发酵液以15000r/min离心旋转10min，取上清，加入同等体积的正丁醇，漩涡震荡10min，混匀后再以10000r/min离心旋转5min，取上层有机相采用高效液相色谱法分析测定。