[发明专利]一种红鳍东方鲀神经坏死病毒衣壳蛋白卵黄抗体及其应用

摘要

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种红鳍东方鲀神经坏死病毒衣壳蛋白卵黄抗体及其应用。所述卵黄抗体由下述方法制备：将红鳍东方鲀神经坏死病毒衣壳蛋白基因重组到GST融合基因表达载体pGEX‑5x‑1中，构建成pGEX‑5x‑1‑CP重组质粒；将pGEX‑5x‑1‑CP重组质粒转化大肠杆菌并诱导融合基因表达；采用包涵体提纯技术提取并纯化得到GST‑CP重组蛋白；用GST‑CP重组蛋白免疫母鸡，收集鸡蛋并从鸡蛋中提取卵黄抗体。本发明所制备的卵黄抗体能够有效抑制红鳍东方鲀神经坏死病毒，效价高，具有良好的免疫保护效力，可以在鱼类的稚鱼期，将其作为抗神经坏死病毒疫苗添加到鱼类饲料中。

主权项

1.一种红鳍东方鲀神经坏死病毒衣壳蛋白卵黄抗体，其特征在于，由下述方法制备得到：（1）通过RT‑PCR方法克隆红鳍东方鲀神经坏死病毒衣壳蛋白基因的DNA，然后重组到谷胱甘肽S‑转移酶融合基因表达载体pGEX‑5x‑1中，构建成pGEX‑5x‑1‑CP重组质粒，所述pGEX‑5x‑1‑CP重组质粒中含有谷胱甘肽S‑转移酶和神经坏死病毒衣壳蛋白的融合基因；所述pGEX‑5x‑1‑CP重组质粒的构建方法为：将DNA和pGEX‑5x‑1载体分别进行双酶切，再进行连接反应得到含有谷胱甘肽S‑转移酶和神经坏死病毒衣壳蛋白的融合基因的pGEX‑5x‑1‑CP重组质粒；（2）重组质粒pGEX‑5x‑1‑CP在大肠杆菌中的表达：将pGEX‑5x‑1‑CP重组质粒转化大肠杆菌，次日挑选转化平板上的大肠杆菌单菌落于含有氨苄青霉素的培养基中扩大培养，利用IPTG诱导谷胱甘肽S‑转移酶和神经坏死病毒衣壳蛋白的融合基因在大肠杆菌中表达；收集菌体，采用包涵体提纯技术提取并纯化得到GST‑CP重组蛋白；所述GST‑CP重组蛋白的分子量大小为66kDa~68kDa；（3）用GST‑CP重组蛋白免疫产蛋母鸡，收集免疫母鸡所产鸡蛋，从所收集的鸡蛋中提取并纯化卵黄抗体；所述免疫为两翅及两侧胸肌注射；所述免疫的次数为3次，每次免疫的时间间隔为2周；所述免疫方式为：首次免疫注射由GST‑CP重组蛋白与等体积完全弗氏佐剂乳化成的疫苗，第二次及第三次免疫注射由GST‑CP重组蛋白与不完全弗氏佐剂乳化成的疫苗。