[发明专利]一种表面锚定人I型金属硫蛋白的食品级乳酸乳球菌及制备方法和应用有效
| 申请号： | 201510155501.1 | 申请日： | 2015-04-02 |
| 公开（公告）号： | CN104818227B | 公开（公告）日： | 2017-06-20 |
| 发明（设计）人： | 王菊芳;马毅;李杉;苏艳芳 | 申请（专利权）人： | 华南理工大学 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12N15/70;C12N15/62;A61K35/744;A61P39/02;C02F3/34;B01D53/84;C12R1/19;C12R1/01;C02F101/20 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司44245 | 代理人： | 宫爱鹏 |
| 地址： | 510006 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种表面锚定人I型金属硫蛋白的食品级乳酸乳球菌及制备方法和应用，步骤如下(1)通过重叠PCR将cA基因与hMT基因拼接，两基因之间引入linker，N端引入促表达标签，得到重组cA‑hMT基因；(2)将重组cA‑hMT基因和表达载体进行连接，得到的连接产物转化至大肠杆菌感受态细胞；(3)将步骤(2)得到的工程菌诱导表达重组融合蛋白，收获菌体超声破碎后离心，上清液直接与食品级乳酸乳球菌孵育，融合蛋白无需纯化则锚定至乳酸乳球菌表面。本发明方法制备的这种表面锚定有人I型金属硫蛋白的食品级乳酸菌，能够富集重金属，制备方法具有高效、安全无毒性、成本低、不需蛋白纯化等优点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 表面 锚定 金属 蛋白 食品级 乳酸 球菌 制备 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种表面锚定人I型金属硫蛋白的食品级乳酸乳球菌的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)构建含锚定单元的人I型金属硫蛋白的重组融合表达载体：通过重叠PCR将cA基因与hMT基因进行拼接，两基因之间引入linker，N端引入促表达标签，得到重组cA‑hMT基因；cA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，hMT基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，linker的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；(2)将重组cA‑hMT基因连接至表达载体pET21a，再将得到的连接产物pET21a‑cA‑hMT转化至大肠杆菌感受态细胞，筛选阳性克隆，经过鉴定得到工程菌；(3)将步骤(2)得到的工程菌诱导表达融合蛋白cA‑hMT，收获菌体后超声破碎，将上清液直接与乳酸乳球菌室温孵育，融合蛋白cA‑hMT则锚定到乳酸乳球菌表面。
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