[发明专利]一种分离骨髓单个核细胞的方法

摘要

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种分离骨髓单个核细胞的方法。所述方法利用明胶溶液可以破坏红细胞表面电荷而加速红细胞的沉积，对其他主成分包括单个核细胞无影响这一点以及骨髓中单个核细胞与其他成分存在密度差异，利用淋巴细胞分离液作密度梯度离心时各种细胞成分按密度梯度重新分布聚集，从而获得单个核细胞这一原理进行骨髓中单个核细胞的分离。利用本发明的方法分离骨髓单个核细胞不会增加MNCs的损失，且能更好地保留骨髓造血干细胞和骨髓间充质干细胞，操作简单方便，可进行临床推广。

主权项

一种分离骨髓单个核细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：取骨髓液与明胶混匀，自然沉降一段时间；步骤2：取步骤1中得到的明胶悬液层进行离心分离操作，弃去上清液，加入PRMI1640培养液重悬细胞；步骤3：取步骤2中得到的重悬细胞液与低糖DMEM培养液混匀，缓慢加入到Ficoll溶液表面，室温下进行离心分离操作；步骤4：离心完毕后，小心吸取步骤3中得到的混悬液中层云雾状细胞层，用PBS洗涤后进行离心分离操作，以含10％胎牛血清的低糖DMEM培养液配成一定浓度的悬液，即得。