[发明专利]军团菌毒力基因检测与分型方法

摘要

本发明公开了军团菌毒力基因检测与分型方法，应用细菌基因组DNA提取液提取待测样品中的细菌基因组DNA；以细菌基因组DNA为模板，用PCR上下游引物混合液进行PCR扩增，同时将阳性对照和阴性对照进行PCR扩增，将所得的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳；若出现条带，则说明标本中含有与PCR上下游引物对应的军团菌毒力基因；反之，则说明标本中不含与PCR上下游引物对应的军团菌毒力基因。本发明的方法不仅能检测临床标本和环境水标本中军团菌毒力基因，还可以将军团菌种进一步分型检测其存在的毒力基因，从而获知军团菌的毒力基因分布形式，鉴别各类军团菌种的致病性及其致病力的强弱。

主权项

军团菌毒力基因检测与分型方法，其特征在于：应用细菌基因组DNA提取液提取待测样品中的细菌基因组DNA；以细菌基因组DNA为模板，用PCR上下游引物混合液进行PCR扩增，同时将阳性对照和阴性对照进行PCR扩增，将所得的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳；若出现条带，则说明标本中含有与PCR上下游引物对应的军团菌毒力基因；反之，则说明标本中不含与PCR上下游引物对应的军团菌毒力基因；其中，所述PCR上下游引物混合液为10对引物，具体为：（1）iraA‑F：5’‑CCTGTAGCGCAACAACAACT‑3’；     iraA‑R：5’‑CCAGGTGCCCTCTATTCCAA‑3’；（2）iraB‑F：5’‑CGCATCCAGTATGGTTTCTC‑3’；     iraB‑R：5’‑AACGTTTCGCAAAATTCAAG‑3’；（3）lvrA‑F：5’‑CAAAGAACAACGCACAAGCA‑3’；     lvrA‑R：5’‑TCAAGCCAATTTGCTGGGT‑3’；（4）lvrB‑F：5’‑TAAAACGATGGAGCCAATC‑3’；     lvrB‑R：5’‑ACCTGCAATGATGATGCAAG‑3’；（5）lvhD‑F：5’‑CAAAATTCAACGCCTGACCG‑3’；     lvhD‑R：5’‑AGGCCAGCCAATCATCAAATC‑3’；（6）cpxR‑F：5’‑AAAATCCCAACTCCCAAAC‑3’；     cpxR‑R：5’‑CGATACTGCGGTCATAAGC‑3’；（7）cpxA‑F：5’‑ACAACCAGCTCGAGAGGA‑3’；     cpxA‑R：5’‑GCCATCACTTGGGAGTTC‑3’；（8）dotA‑F：5’‑TTGGTGCAGCCGATAAAAT‑3’；     dotA‑R：5’‑ACCCCACAAGGTGGACTCTT‑3’；（9）icmC‑F：5’‑ATGGAGAAGCCAGGACAA‑3’；     icmC‑R：5’‑ACCCGGATAATCATCACCA‑3’；（10）icmD‑F：5’‑GGCTAGTAAGCGCAGCTTG‑3’；      icmD‑R：5’‑CCCAATCCAGCCAAGTAAG‑3’。