[发明专利]一种玛咖多倍体植株的培育方法

摘要

本发明公开了一种玛咖多倍体植株的培育方法，所述方法包括将消毒后的玛咖种子接种于空白B5培养基中，种子萌发后取其下胚轴接种于含较高秋水仙素的愈伤组织诱导培养基上培养，将获得的愈伤组织转接于含较低秋水仙素的丛芽诱导及增殖培养基中培养，之后继代增殖3‑4代，获得玛咖多倍体丛生芽；当多倍体丛生芽长至3‑4cm时，将单芽切下转接至生根培养基中，培养25d后即可得到玛咖多倍体试管苗；多倍体试管苗按常规进行炼苗3d后，移栽至装有消毒腐殖质的漂浮盘中，培养60d得到玛咖多倍体种苗。本发明优点在于愈伤组织阶段即可进行筛选，方法简单、诱导率高，嵌合体少，死亡率低，获得的多倍体材料能通过分生增殖获得大量多倍体试管苗，极大地缩短了诱导时间，诱导的多倍体植株品质优良且抗逆性强。

主权项

一种玛咖多倍体植株的培育方法，其特征在于，所述培育方法包括以下步骤：（1）以B5为基本培养基，附加蔗糖20000mg/L和琼脂粉4800mg/L，调整pH值为5.4‑5.8，制得培养基A；用细纱布将玛咖种子按100粒/包，包好放到流水下冲洗2 h后，置于超净工作台上，用体积比75％的酒精浸泡60 s，再用质量比0.1％ HgCl2灭菌8 min，最后用无菌水冲洗10次，每次不低于2 min，之后放在无菌滤纸上，打开细纱布吸干表面水分，得到消毒灭菌处理的种子，将所述消毒灭菌后的玛咖种子接种于所述培养基A中，在光照度1500‑2000 lx，光照时间10 h/d，温度控制在20±1℃的条件下，进行种子萌发；（2）以B5为基本培养基，附加萘乙酸NAA 1.5‑2.0 mg/L、玉米素ZT 0.1‑1.0 mg/L、秋水仙素0.5‑2.0 mg/L、蔗糖20000mg/L和琼脂粉4800mg/L，调整pH值为5.4‑5.8，制得愈伤组织诱导培养基B；所述步骤（1），种子在所述培养基A中培养5‑7d后，幼苗子叶完全展开，将下胚轴切为0.5‑1.0 cm大小，转接至所述愈伤组织诱导培养基B中，在光照度1500‑2000 lx，光照时间10 h/d，温度控制在20±1℃的条件下，培养5d后有愈伤组织出现，20d后愈伤组织生长迅速，质地紧密，表被白色绒毛；（3）以B5为基本培养基，附加6‑苄胺基嘌呤6‑BA 1.0‑2.0 mg/L、萘乙酸NAA 1.5‑2.0 mg/L、玉米素ZT 0.1‑1.0 mg/L、秋水仙素0.05‑0.5 mg/L、蔗糖20000 mg/L和琼脂粉4800 mg/L，调整pH值为5.4‑5.8，制得丛生芽诱导与增殖培养基C；将所述步骤（2）中培养的愈伤组织切割为0.5‑1.0 cm2大小，转接至所述丛生芽诱导与增殖培养基C中，在光照度1500‑2000 lx，光照时间10 h/d，温度控制在20±1℃的条件下，培养20d，待丛生芽生长旺盛时，将丛生芽切割为3‑5芽一丛，转接至另一个新鲜的所述丛生芽诱导与增殖培养基C中，如此反复继代增殖3‑4代，即获得玛咖多倍体芽；（4）以1/2B5为基本培养基，附加萘乙酸NAA 0.1‑0.5 mg/L、吲哚丁酸IBA 0.1‑0.5 mg/L、活性炭AC 0.5‑1.5 mg/L、蔗糖10000 mg/L和琼脂粉4800mg/L，调整pH值为5.4‑5.8，制得生根培养基D；切取所述步骤（3）所得的多倍体芽中高3‑4 cm、生长健壮的单芽接种于所述生根培养基D中，在光照度1500‑2000 lx，光照时间10 h/d，温度控制在20±1℃的条件下，培养25 d后获得玛咖多倍体试管生根苗；（5）取所述步骤（4）所得的高6‑8cm的生根苗置于室温下炼苗3 d后，打开瓶盖从所述生根培养基D中取出幼苗，将残留培养基清洗干净，放入质量浓度0.1‑0.2%的多菌灵溶液中消毒2‑3 min后，移栽至装有经消毒的腐殖质的漂浮盘中，保持18‑25℃温度漂浮培养60 d后，即得玛咖多倍体移栽苗。