[发明专利]一种快速检测水貂病毒性肠炎病毒的双重PCR方法在审

专利信息
申请号: 201510172812.9 申请日: 2015-04-14
公开(公告)号: CN104726616A 公开(公告)日: 2015-06-24
发明(设计)人: 谢之景;姜常青 申请(专利权)人: 山东农业大学
主分类号: C12Q1/70 分类号: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93
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地址: 271018 *** 国省代码: 山东;37
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摘要: 发明涉及一种快速检测水貂病毒性肠炎病毒的双重PCR方法,包括:分别合成MEV非结构蛋白NS1基因片段的特异性引物SEQ.ID.NO 1和SEQ.ID.NO 2,MEV结构蛋白VP2基因片段的特异性引物SEQ.ID.NO 3和SEQ.ID.NO 4,以上述两对引物为双重引物,以MEV的DNA为模板,在同一反应体系中进行PCR反应,可完成对MEV的快速检测。本发明根据PCR技术原理,根据MEV的特点,建立了检测MEV的双重PCR检测方法,其简单、快速、特异性好、灵敏度高,可以用于MEV的快速检测。
搜索关键词: 一种 快速 检测 水貂 病毒性 肠炎 病毒 双重 pcr 方法
【主权项】:
一组用于快速检测水貂病毒性肠炎病毒的特异性引物,其特征在于选择在MEV的非结构蛋白NS1基因的保守区与结构蛋白VP2基因的保守区,分别设计一对针对NS1基因片段的特异性引物SEQ.ID.NO 1/SEQ.ID.NO 2和一对针对VP2基因片段的特异性引物SEQ.ID.NO 3/SEQ.ID.NO 4;SEQ.ID.NO 1:5’‑GGTTAGCTAAACATGGTTATG‑3’;SEQ.ID.NO 2:5’‑GAGTCAGAGGAGTTAGAACG‑3’;SEQ.ID.NO 3:5’‑CTTTGCCTCAATCTGAAGGAGT‑3’;SEQ.ID.NO 4:5’‑GAATTGGATTCCAAGTATGAGAT‑3’;上述引物的使用方法如下:A、以MEV DNA为模板进行PCR反应;反应体系为:17.3μl ddH2O(Rnase free),2.5μl Buffer,2μl dNTPs(10.0mM),SEQ.ID.NO 1和SEQ.ID.NO 2各1.0μl,SEQ.ID.NO 3和SEQ.ID.NO 4各1.0μl,1μl DNA模板,0.2μl Taq酶;PCR反应条件为:95℃5min;94℃30s,53℃30s,72℃1min,32个循环;72℃10min;B、对步骤A得到的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测:如果同时扩增出了191bp和824bp的产物,则该样品为阳性,样品中含有MEV。
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