[发明专利]一种肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶基因型检测方法

摘要

本发明公开了一种肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶基因型检测方法，所述方法为以待测菌株基因为模板，在引物1和引物2作用下进行PCR扩增反应，然后以扩增产物为模板，在引物3‑引物8的混合引物作用下进行SNaPshot PCR反应；根据SNaPshot PCR反应产物进行分型；本发明首次提供了一种同时对KPC1‑KPC15共14种亚型的分型检测方法，检测通量较传统的定量检测方法都高，准确度可与测序检测方法相当，费用更低。

主权项

一种非疾病诊断目的的肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶基因型检测方法，其特征在于所述方法为：以待测菌株基因为模板，在引物1和引物2作用下进行PCR扩增反应，然后以扩增产物为模板，在引物3‑引物8的混合引物作用下进行SNaPshot PCR反应，对SNaPshot PCR产物进行测序；若SNaPshot PCR产物在147位、308位和814位均为C碱基，272位为T碱基，502位为G碱基，716位为A碱基，则待测菌株的碳青霉烯酶基因型为KPC‑1或KPC‑2；若SNaPshot PCR产物在147位、308位为C碱基，272位和814位为T碱基，502位为G碱基，716位为A碱基，则待测菌株的碳青霉烯酶基因型为KPC‑3；若SNaPshot PCR产物在147位、716位和814位为C碱基，在308位和502位为G碱基，在272位为T碱基，则待测菌株的碳青霉烯酶基因型为KPC‑4；若SNaPshot PCR产物在147位和814位为C碱基，在308位和502位为G碱基，在272位为T碱基，在716位为A碱基，则待测菌株的碳青霉烯酶基因型为KPC‑5；若SNaPshot PCR产物在147位、308位、716位和814位为C碱基，在272位为T碱基，在502位为G碱基，则待测菌株的碳青霉烯酶基因型为KPC‑6；若SNaPshot PCR产物在147位、272位和814位为T碱基，在308位为C碱基，在502位为G碱基，在716位为A碱基，则待测菌株的碳青霉烯酶基因型为KPC‑7；若SNaPshot PCR产物在147位、308位和716位为C碱基，在272位和814位为T碱基，在502位为G碱基，则待测菌株的碳青霉烯酶基因型为KPC‑8；若SNaPshot PCR产物在147位和308位为C碱基，在272位和814位为T碱基，在502位和716位为G碱基，则待测菌株的碳青霉烯酶基因型为KPC‑9；若SNaPshot PCR产物在147位为C碱基，在308位和502位为G碱基，在272位和814位为T碱基，716位为A碱基，则待测菌株的碳青霉烯酶基因型为KPC‑10；若SNaPshot PCR产物在147位和814位为C碱基，在502位为G碱基，在308位和272位为T碱基，716位为A碱基，则待测菌株的碳青霉烯酶基因型为KPC‑11；若SNaPshot PCR产物在147位、308位和814位为C碱基，在272位和502位为T碱基，716位为A碱基，则待测菌株的碳青霉烯酶基因型为KPC‑12；若SNaPshot PCR产物在147位、308位和272位为C碱基，在502位为G碱基，在814位为T碱基，716位为A碱基，则待测菌株的碳青霉烯酶基因型为KPC‑13；若SNaPshot PCR产物在147位、308位、272位和814位为C碱基，在502位为G碱基，716位为A碱基，则待测菌株的碳青霉烯酶基因型为KPC‑14；若SNaPshot PCR产物在147位和716位为C碱基，在308位和502位为G碱基，在272位和814位为T碱基，则待测菌株的碳青霉烯酶基因型为KPC‑15；引物1为：5’‑CTGTATCGCCGTCTAGTTCTGCTGT‑3’；引物2为：5’‑CAGAGCCTTACTGCCCGTTGA‑3’；引物3为：5’‑(T)3GCGCCTGAGCCGGTATC‑3’；引物4为：5’‑(T)9GCAAAAATGCGCTGGTTC‑3’；引物5为：5’‑(T)14CCGTAACGGATGGGTGTG‑3’；引物6为：5’‑(T)20GGGATGGCGGAGTTCA‑3’；引物7为：5’‑(T)28GTCATTTGCCGTGCCATAC‑3’；引物8为：5’‑(T)38GCGCCTAACAAGGATGACAAG‑3’。