[发明专利]尼帕病毒和猪繁殖与呼吸综合症病毒二重荧光RT-PCR检测试剂及其制备方法与用途

摘要

本发明公开了一种尼帕病毒和猪繁殖与呼吸综合症病毒的二重荧光RT-PCR检测试剂及其制备方法与用途，设计合成了二套分别针对尼帕病毒M基因和猪繁殖与呼吸综合症病毒NSP2基因的特异性引物及Taqman探针和阳性对照，并利用这二套引物及探针建立了一种快速简便、特异性强、灵敏度高的二重荧光RT-PCR检测体系，可在3～4小时内从被检样本中快速、准确、特异、安全、简便地同时检出尼帕病毒和猪繁殖与呼吸综合症病毒的核酸，可用于同时检测猪及其相关样本中微量尼帕病毒和猪繁殖与呼吸综合症病毒的核酸。

主权项

一种尼帕病毒和猪繁殖与呼吸综合症病毒的二重荧光RT‑PCR检测试剂，其特征在于，包括用于分别检测尼帕病毒M基因和猪繁殖与呼吸综合症病毒NSP2基因的二对特异性引物、二条特异性探针和二个阳性对照，扩增目标长度分别为79bp和95bp，引物和探针序列为：尼帕病毒上游引物：NIPHA‑M‑F:5’‑GCTCAACAGATTGACCTGGAAC‑3’      SEQ ID NO.1下游引物：NIPHA‑M‑R：5’‑AACAGAAGGCTGCAACACAGC‑3’      SEQ ID NO.2探针：NIPHA‑M‑P:5’‑FAM‑CTCGGCTGATCTCACA‑3’‑MGB        SEQ ID NO.3阳性对照：GATGGACATCAATCCTTGGCTCAACAGATTGACCTGGAACAACAGTTGTGAGATCAGCCGAGTAGCAGCTGTGTTGCAGCCTTCTGTTCCAAGAGAGTTCATGATCTATGATGATGTCTTC；SEQ ID NO.4猪繁殖与呼吸综合征病毒上游引物：PRRSV‑NSP2‑F:5’‑CTCACAGACGGAATATGAGGC‑3’      SEQ ID NO.9下游引物：PRRSV‑NSP2‑R:5’‑CACTCAGGACTTCCTCAGCTTC‑3’     SEQ ID NO.10探针：PRRSV‑NSP2‑P:5’‑VIC‑CACCATCGCAGAAC‑MGB‑3’         SEQ ID NO.11阳性对照：GATGAGCCTCTGGATTTGTCTGCGTCCTCACAGACGGAATATGAGGCTTTCCCCCTAGCACCATCGCAGAACATGGGCATCCTGGAGGCGGGGGGGCAAGAAGCTGAGGAAGTCCTGAGTGAAATCTCSEQ ID NO.12。