[发明专利]一种用于多种蛋白酶活性长时间实时并行检测的纳米探针

摘要

本发明属于蛋白质检测领域，具体涉及一种基于能量转移的可用于活细胞内多种蛋白酶活性长时间实时并行检测的纳米探针。该探针的结构为“穿透肽‑量子点‑底物多肽‑纳米金颗粒”，它能高效率地进入细胞，且进入细胞的方式对细胞无伤害。此探针抗光漂白性能强，能长时间检测活细胞内的蛋白酶活性，可达一个月。它能够反映出蛋白酶在细胞内的分布，并实时反映出各待测蛋白酶被激活的时间，以及待测蛋白酶在细胞中表现出活性的次序。利用此探针能够更加全面地了解细胞中酶的特性，以及各种酶之间的相互影响。

主权项

一种用于多种蛋白酶活性长时间实时并行检测的纳米探针，其特征在于，利用量子点(2)和纳米金颗粒(4)分别作为供体和受体，通过底物多肽(3)连接量子点(2)和纳米金颗粒(4)形成能量转移供受体对，且用穿透肽(1)修饰供受体对，即形成以“穿透肽‑量子点‑底物多肽‑纳米金颗粒”为结构的蛋白酶活性检测探针；使用不同发射光谱的量子点(2)分别结合含有不同酶切位点的底物多肽(3)，得到检测不同蛋白酶的多种探针；当这些探针均进入活细胞内部时，在同一种波段的激发光下即可实现多种蛋白酶的并行检测；所述穿透肽(1)为细胞生长因子EGF，其一端用生物素修饰；所述量子点(2)表面用链霉亲和素修饰；所述底物多肽(3)包含待测蛋白酶水解的位点，底物多肽(3)的结构为biotin‑GRRG‑XXXX‑GGRRC，其中biotin代表用于偶联的生物素，中间段未知氨基酸序列‑XXXX‑提供酶解位点；所述底物多肽(3)中，头尾两端氨基酸序列GRRG‑与‑GGRRC均为D型氨基酸；中间段未知氨基酸序列‑XXXX‑为L型天然氨基酸；所述纳米金颗粒(4)，直径范围为2nm‑15nm。