[发明专利]一种草金鱼腹鳍细胞系的构建方法

摘要

本发明涉及一种草金鱼腹鳍细胞系及其构建方法，针对草金鱼腹鳍组织细胞的特征，采用胰蛋白酶、EDTA、透明质酸酶对组织块进行消化，将消化后的组织块移植到培养瓶中，加入专用增殖培养液进行原代培养，继而构成功构建草金鱼腹鳍细胞系。通过本发明的方法原代培养3天后均能分离大量细胞，均具有连续传代的能力；稳定传代后，细胞呈典型的成纤维形态，证明该细胞系是一种特性稳定、成分均一的中国草金鱼腹鳍细胞系，是作为研究水产动物病毒学和免疫学的良好材料。目前，该草金鱼腹鳍细胞系已传代60代，细胞能稳定增殖，具有连续传代的能力。

主权项

一种草金鱼腹鳍细胞系的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：1)组织块的处理：剪取草金鱼腹鳍组织，于浓度为1000IU/ml青霉素‑链霉素双抗溶液中浸泡30分钟，以75％酒精消毒处理，用浓度为2.5ug/ml的两性霉素B的D‑PBS冲洗3次，无菌条件下将腹鳍组织剪成1mm3的组织块，将组织块浸泡在在0.25％胰蛋白酶和0.02％EDTA中消化10min后，再用0.5％透明质酸酶消化1h；2)原代培养：将组织块移植到底面积为25cm2的培养瓶中，保持温度为26℃，于组织块移植后的第15小时加入2ml增殖培养液，第24小时加入3ml增殖培养液，每天半量更换培养液一次；3)传代培养：原代培养细胞长成单层后，加入胰蛋白酶静置消化，然后用增殖培养液悬起细胞，以1:2进行传代，于26℃进行传代培养；所述增殖培养液为含有18v/v％胎牛血清、15ng/ml人碱性成纤维生长因子、2ng/ml表皮生长因子、1ng/ml I型胰岛素样生长因子、200IU/ml青霉素、200ug/ml链霉素、0.5ug/ml两性霉素B、10mM 2‑巯基乙醇的M199培养液。