[发明专利]一种利用无色透明EVA热熔胶棒制作真菌分生孢子器临时玻片标本的方法

摘要

本发明公开一种利用无色透明EVA热熔胶棒制作真菌分生孢子器临时玻片标本的方法。该方法包括在真菌分生孢子器上用无水乙醇脱水进行固定和脱水，用无色透明EVA热熔胶棒的一端置于酒精灯上至熔而不滴后包埋真菌分生孢子器。用本发明方法制作真菌分生孢子器临时玻片标本步骤节省、省去了FAA固定液固定及透明等的程序，节省时间、效率高，无需专用贵重设备、成本大为降低，本发明采用了全新的包埋物，制片效果较好，完全能满足真菌界分生孢子器形态学鉴定的需要。

主权项

一种利用无色透明EVA热熔胶棒制作真菌分生孢子器临时玻片标本的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)取材在5倍的体视显微镜下，从PDA培养基平板上挑取真菌分生孢子器，放到载玻片上备用；(2)固定和脱水在所述真菌分生孢子器上滴加25μL～200μL无水乙醇脱水，待所述真菌分生孢子器表面硬化；(3)包埋将无色透明EVA热熔胶棒的一端置于酒精灯上加热至其熔而不滴，室温冷却1s～2s后，用针将步骤(2)所述真菌分生孢子器挑入经过酒精灯上加热至熔而不滴的无色透明EVA热熔胶棒的该端内包埋，将包埋了所述真菌分生孢子器的无色透明EVA热熔胶棒的该端置于水中冷却至该端固化；(4)切片在5倍的体视显微镜下，用刀片对包埋好的真菌分生孢子器进行切片，切片厚度为100μm～150μm，切成3‑5片，切片长度为4mm～6mm；(5)染色和/或脱水处理①染色和脱水处理：每个切片采用苏木精伊红染色法染色后，再加25μL～50μL无水乙醇脱水10min；或②脱水处理：在每个切片上加25μL～50μL无水乙醇脱水10min；(6)选片和整理选取步骤(5)①或步骤(5)②所述切片中真菌分生孢子器完整的切片，用刀片将其整理成面积大小为2mm×3mm小片，至于载玻片上备用；(7)封片在步骤(6)所述载玻片上的切片上滴加混合液25μL～50μL，再将盖玻片盖在该载玻片的切片上，用滤纸擦净盖玻片周围的混合液，再将载玻片置于酒精灯上烘至载玻片上包埋切片的EVA热熔胶熔化，即制成真菌分生孢子器临时玻片标本，所述混合液有甘油和水按2:1的体积比混合而成。