[发明专利]分子标记法检测水稻温敏雄性不育tms9-1基因的方法

摘要

本发明涉及水稻品种资源特性的检测技术，尤其涉及一种分子标记法检测水稻温敏雄性不育tms9-1基因的方法及其分子标记。该方法包括：特异性dCAPS分子标记QY-1，其上游引物QY-1F的核苷酸序列为5′-GTGGACACGGCGAGGAAGGGCCAC-3′，下游引物QY-1R的核苷酸序列为5′-CGAGCATGAAGCGGAGGAGGTCCCCG-3′；PCR后产物进一步内切酶Sma1酶切，经3%琼脂糖凝胶120 U电压电泳30min后仅检测到大片段，待测DNA样品经过PCR扩增和Sma1酶切后，电泳方式能检测出259bp片段的含tms9-1基因的水稻材料，而片段大小为286bp的则是无tms9-1基因的水稻材料。该方法检测特异性好、准确性高、操作简便、成本低廉、实用性强。

主权项

分子标记法检测水稻温敏雄性不育tms9‑1基因的方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：1）提取待测样品的DNA， 采用分子标记QY‑1进行PCR扩增，分子标记QY‑1的引物对为：QY‑1F：5′‑GTGGACACGGCGAGGAAGGGCCAC‑3′；QY‑1R：5′‑CGAGCATGAAGCGGAGGAGGTCCCCG‑3′；PCR扩增条件为95℃预变性3min、95℃变性30 sec、60℃退火30 sec、72℃延伸30 sec，共35个循环，最后72℃延伸5 min；2）PCR反应产物用于Sma1酶切反应，酶切方法为：PCR反应产物10μl、Sma1限制性内切酶0.5μl，浓度为1 U/μl、10×FastDigest buffer 2μl，去离子水7.5μl，酶切反应在30℃水浴锅中温浴20 min，加入4μl 6×loading buffer后于3%琼脂糖凝胶120U电压电泳30 min，在Tanon2500凝胶成像仪进行拍照；3）待测DNA样品经过PCR扩增和Sma1酶切后，电泳方式能检测出259bp片段的含tms9‑1基因的水稻材料，而片段大小为286bp的则是无tms9‑1基因的水稻材料。