[发明专利]产γ‑氨基丁酸的重组菌及其构建方法与应用

摘要

本发明公开了产γ‑氨基丁酸的重组菌及其构建方法与应用。采用本发明的方法将谷氨酸脱羧酶B基因(gadB基因)通过表达载体pBAD/HisB导入到大肠杆菌突变株K12ΔgadABC中构建的基因工程菌KG01阻断了γ‑氨基丁酸的降解途径并且钝化了谷氨酸γ‑氨基丁酸反向转运蛋白对pH的敏感性，有效地减少了γ‑氨基丁酸的降解提高了GABA的产量和转化效率。KG01菌株的转化率不受pH变化的影响，而且GABA的产量最高，明显高于K12ΔgabT菌株和K12菌株。以浓度为2M的谷氨酸为底物，KG01菌株连续转化三次，每次的转化率均在99％以上，产量均大于204g/L，底物残留量低，便于下游结晶精制。采用本发明的方法构建的基因工程菌生产γ‑氨基丁酸，具有原料低廉，工艺简单，生产效率高等优点，具有良好的工业化应用前景。

主权项

产γ‑氨基丁酸的重组菌的构建方法，包括将谷氨酸脱羧酶B基因导入受体菌得到产γ‑氨基丁酸的重组菌；所述受体菌为突变型大肠杆菌；所述谷氨酸脱羧酶B基因编码氨基酸序列是SEQ ID No.1的蛋白质；所述突变型大肠杆菌为下述B1至B4和B6‑B7中的任一种：B1、所述突变型大肠杆菌为对野生型大肠杆菌进行下述b1‑b3的改造得到的所述野生型大肠杆菌的突变体；b1、将谷氨酸脱羧酶A基因敲除；b2、将所述谷氨酸脱羧酶B基因敲除；b3、将谷氨酸：γ‑氨基丁酸反向转运蛋白基因截短得到谷氨酸：γ‑氨基丁酸反向转运蛋白截短突变体基因；B2、所述突变型大肠杆菌为对野生型大肠杆菌进行所述b1改造得到的所述野生型大肠杆菌的突变体；B3、所述突变型大肠杆菌为对野生型大肠杆菌进行所述b2改造得到的所述野生型大肠杆菌的突变体；B4、所述突变型大肠杆菌为对野生型大肠杆菌进行所述b1和所述b2改造得到的所述野生型大肠杆菌的突变体；B6、所述突变型大肠杆菌为对野生型大肠杆菌进行所述b1和所述b3改造得到的所述野生型大肠杆菌的突变体；B7、所述突变型大肠杆菌为对野生型大肠杆菌进行所述b2和所述b3改造得到的所述野生型大肠杆菌的突变体。