[发明专利]一种定量分析微量血干血滤纸片上视黄醇及其前体的方法有效

专利信息
申请号: 201510232220.1 申请日: 2015-05-08
公开(公告)号: CN104914176B 公开(公告)日: 2018-01-02
发明(设计)人: 李廷玉;苗静琨;邹琳;余加林;杨亭 申请(专利权)人: 重庆医科大学附属儿童医院
主分类号: G01N30/02 分类号: G01N30/02;G01N30/06
代理公司: 重庆弘旭专利代理有限责任公司50209 代理人: 文巍
地址: 400014 *** 国省代码: 重庆;85
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摘要: 发明提供了一种检测视黄醇及其前体的方法,包括以下步骤(1)从样品中萃取视黄醇和/或其前体;(2)HPLC分离视黄醇和/或其前体;(3)MS/MS定量检测;所述样品是干血滤纸片标本,采用的萃取剂为三氯甲烷。本发明利用滤纸片作为载体吸附微量血,制成干血滤纸片,克服了以往收集血清检测视黄醇时静脉血采集时取血多,人群依从性差,动物模型抽血死亡,标本不方便远距离运送等困难。本发明基质效应小、在标准曲线中的浓度范围内分析的线性关系良好、检出限较低、灵敏度高、准确性好、精密度高,与HPLC方法检测血清视黄醇结果具有相关性,并同时同步分析样品中视黄醇及其前体含量,为全面评估体内视黄醇水平提供了方法。
搜索关键词: 一种 定量分析 微量 血干血 滤纸 片上视黄醇 及其 方法
【主权项】:
一种检测视黄醇及其前体的方法,包括以下步骤:(1)从样品中萃取视黄醇和/或其前体,包括以下步骤:①血片溶解:将载有微量血的干血滤纸片用打孔器打出直径3.2mm圆形滤纸血片,置于1.5ml EP管中,加入100µl含0.1% BHT作为抗氧化剂的去离子水,室温振摇,1000rpm,2min,充分溶解血液;②蛋白变性:取步骤①所得血斑标本,加入200μl含有0.1% BHT和0.025 mmol/L KOH的甲醇变性沉淀蛋白质,漩涡震荡2min;③萃取:以300μl三氯甲烷作为萃取剂加入步骤②所得的溶液中,室温振摇2min,离心13200 rpm,8min;④吸取底层的有机溶剂层180μl,氮气吹干,加入100μl流动相充分溶解,用于HPLC‑MS/MS检测;(2)HPLC分离视黄醇及其前体;(3)MS/MS定量检测。
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