[发明专利]一种筛选布莱凯特黑牛优质牛种的方法及使用的引物和试剂盒

摘要

本发明公开了一种筛选布莱凯特黑牛优质牛种的方法，包括：PCR扩增布莱凯特黑牛PID1基因第2外显子的基因序列，选择PID1基因第2外显子第285位碱基为G的布莱凯特黑牛为优质牛种。本发明还公开了筛选所需的引物和试剂盒。本发明首次提出以检测PID1基因突变碱基来筛选优质牛种的方法，为培育优质布莱凯特肉牛品种提供了新的思路。本发明优选使用PCR‑RFLP方法来检测布莱凯特黑牛碱基突变和基因型，通过电泳片段的个数即可筛选出优质牛种，把测序技术筛选SNP和PCR‑RFLP技术结合起来，解决了SSCP的不稳定性和普通RFLP的局限性，简单、快速、成本低、精确度高、检测结果直观、便于推广。

主权项

1.一种筛选布莱凯特黑牛优质牛种的方法，其特征是：PCR扩增布莱凯特黑牛PID1基因第2外显子的基因序列， 选择PID1基因第2外显子的第285位碱基为G的布莱凯特黑牛为优质牛种；包括以下步骤：（1）取布莱凯特黑牛待检样本，提取DNA，作为PCR扩增的模板DNA；（2）采用PCR扩增布莱凯特黑牛PID1基因第2外显子，得PCR产物，扩增所用的引物如下：上游引物：5’GTGACCTATCTGGGTAAGGTGCCC3’下游引物：5’TCAGCCATCATCAGATTCTAATTCCTGGG3’；（3）利用限制性内切酶酶切扩增的PCR产物，再对酶切后的片段进行琼脂糖凝胶电泳检测，选择琼脂糖凝胶电泳产生1个片段的布莱凯特黑牛为优质牛种；所述限制性内切酶为限制性内切酶 AseⅠ。