[发明专利]微生物鉴定用质谱仪分子量校正标准品及其制备方法与应用

摘要

本发明提供一种微生物鉴定用质谱仪分子量校正标准品及其制备方法与应用，涉及微生物肽质量指纹谱的基质辅助激光解析飞行时间质谱鉴定技术领域。本发明基于基质辅助激光解析飞行时间质谱技术，通过对多种大肠杆菌的组合与优化，提供一种依据多种大肠杆菌的优化肽序列，以该序列谱为基础构建适用于目前商业化质谱微生物鉴定系统的校正标准品。本发明提供的标准品制备方法简单、成本低廉，利用其作为微生物鉴定的质谱仪分子量校正标准品，具有稳定性好、便于操作、校正时间短、重复性好的优点，且校正峰的肽序列丰富，准确度高，能够解决目前微生物鉴定用质谱仪校正标准品获得困难或操作条件苛刻的问题，具有良好的经济价值和应用前景。

主权项

1.微生物鉴定用质谱仪分子量校正标准品，其特征在于，含有大肠杆菌（Escherichia coli）特征蛋白，该特征蛋白的质荷比m/z分别为：2094，2466，3149，4364，5095，5380，6241，6254，6315，6410，6856，7157，7273，7872，8368，9742，10137，10299，12227；所述的标准品通过以下方法制备得到：（1）选择大肠杆菌ATCC8739、MG1655、JM109，将三株菌培养至对数生长期后，收集菌株，按照质量比3‑8：1‑5:1‑3将三者混合；（2）按照质量体积比5‑10 mg:0.1‑0.5mL向三株大肠杆菌混合物中加入蛋白洗涤液A，再按照与蛋白洗涤液A的体积比5‑2:1加入蛋白洗涤液B；混匀、离心、弃上清；所述蛋白洗涤液A为去离子水或超纯水；蛋白洗涤液B为无水乙醇；（3）向步骤（2）获得的沉淀中加入蛋白溶解液A，二者的质量体积比为5‑10 mg:0.025‑0.125 mL，充分混匀后再加入与蛋白溶解液A相同体积的蛋白溶解液B，离心，取上清即为标准品；所述蛋白溶解液A为50%‑80%的色谱级甲酸，蛋白溶解液B为色谱级乙腈。