[发明专利]一种拜城油鸡腿肌中高肌内脂肪含量的遗传标记的制备方法及应用有效
申请号: | 201510257019.9 | 申请日: | 2015-05-15 |
公开(公告)号: | CN104830838B | 公开(公告)日: | 2018-03-27 |
发明(设计)人: | 王永;惠晓红;孟炜;吐尔逊江库尔班 | 申请(专利权)人: | 塔里木大学 |
主分类号: | C12Q1/6888 | 分类号: | C12Q1/6888;C12Q1/6858 |
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地址: | 843300 新疆维*** | 国省代码: | 新疆;65 |
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摘要: | 本发明公开了一种拜城油鸡腿肌中高肌内脂肪含量的遗传标记的制备方法及应用,本发明选取120日龄拜城油鸡白羽60只,公母各半,检测H‑FABP第二外显子多态性和腿肌中肌内脂肪IMF的含量,并分析两者之间的关系。本发明经过实验可知,本发明所述方法制备的遗传标记选择腿肌中IMF含量高的拜城油鸡。 | ||
搜索关键词: | 一种 拜城 油鸡 中高 脂肪 含量 遗传 标记 制备 方法 应用 | ||
【主权项】:
一种拜城油鸡腿肌中高肌内脂肪含量的遗传标记制备方法,其特征在于,包括以下步骤:I.聚丙烯酰胺凝胶的制备用12%的聚丙烯酰胺凝胶分离待测片段;根据玻璃板规格的不同,分别配制7ml、10ml的胶,配方为:II.样品的制备1、设计引物,样品片段长度一般应在150‑300bp之间;所述引物为:forward:5′‑CGACAAGGCGACGGTGAA‑3′reverse:5′‑TGGGGCAGGAAGGAGTTT‑3′;2、PCR扩增目的片段,琼脂糖凝胶检测;3、样品稀释:根据琼脂糖凝胶检测结果,如果PCR产物很浓,则将PCR产物稀释3倍;若PCR产物浓度较弱,则不稀释;4、取1μl稀释好的PCR产物,加入9ul变性缓冲液中,混匀;5、变性缓冲液:溴酚蓝5mg,0.5M EDTA.Na2 pH8.0 400μl,甲酰胺9.6ml,混匀;III.变性1、开启PCR仪,将程序设置为98℃11min;2、将混有甲酰胺的样品放入PCR仪中,开始变性;3、准备冰盒;4、当变性10min时,打开PCR仪,迅速将样品插入冰中,保持10min;IV.上样电泳1、电泳前,所用的胶,电泳缓冲液都要先预冷;2、取样品3μl,依次点到事先制好并且制冷的聚丙烯酰胺凝胶中;点样时注意标准品不要点到胶的最边上两个孔,以免由于制胶不均匀或其他原因造成的标准品分型不好,起不到指示作用;3、将电泳槽放到4℃冰箱中,连上电泳仪,250V跑10min,50V 16h;4、电泳条件因待分离片段的不同而不同,因此若以上条件不能够将不同的基因型分开,则尝试其他的条件;V.染色1)固定:把胶卸下,做好起始记号,放入80ml固定液中在摇床上固定10min;2)染色:60ml染色液+60μl甲醛,染色6min,蒸馏水洗涤一次;3)显色:60ml显色液+120μl甲醛,放到摇床上显色至条带清晰;倒掉显色液,加蒸馏停止显色。
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