[发明专利]用于樱桃病毒检测的多重RT‑PCR试剂盒及检测方法

摘要

本发明涉及“用于樱桃病毒检测的多重RT‑PCR试剂盒及检测方法”，属于植物病毒检测领域。本发明提供的多重PCR试剂盒，包含独立包装或者混装在一起的四对引物CVA‑F/R,ACLSV‑F/R,CGRMV‑F/R以及LChV‑1F/R，所述樱桃病毒为CVA,ACLSV,CGRMV和/或LChV‑1。采用本发明试剂盒检测这四种樱桃病毒，灵敏度高只需提取待测樱桃植株的叶片或韧皮部的总RNA(低至2ng)，反转录成cDNA，按照引物摩尔比CVAACLSVCGRMVLChV‑1＝111.250.510进行PCR反应，即可检测出待测样品中是否含有这四种病毒中的一种、两种、三种或全部；特异性强对检测的病毒基因片段进行测序，结果表明，四个病毒基因片段均为目的片段。

主权项

用于检测樱桃病毒的多重PCR试剂盒，其特征在于：包含混装在一起的如下的四对引物：CVA‑F：5’‑TGTTGGGGCACAGTTTCAAG‑3’，CVA‑R：5’‑TGATTGGTGACGGTGAAGGA‑3’；ACLSV‑F：5’‑TCTGCAAGAGAATTTCAGTT‑3’，ACLSV‑R：5’‑GTCTACAGGCTATTTATTATAAG‑3’；CGRMV‑F：5’‑AGGCTAGGAATGGGATCAGC‑3’，CGRMV‑R：5’‑GTAACTTTAGCTTCGCCCCG‑3’；LChV‑1F：5’‑GGTTGTCCTCGGTTGATTAC‑3’，LChV‑1R：5’‑GGCTTGGTTCCATACACTTC‑3’；所述樱桃病毒为CVA，ACLSV，CGRMV和/或LChV‑1；所述四对引物的摩尔比为CVA：ACLSV：CGRMV：LChV‑1＝1：11.25：0.5：10。