[发明专利]荧光SiO2胶体试剂的制备方法及使用荧光SiO2胶体试剂的试纸

摘要

本发明公开了荧光SiO2胶体试剂的制备方法及使用荧光SiO2胶体试剂的试纸，制备方法包括制备氨基修饰的荧光SiO2纳米粒子；SiO2纳米氨基的羧基化；通过羧基化荧光SiO2纳米粒子与抗体蛋白的偶联，得到荧光SiO2纳米粒子。本发明的有益效果是通过制备氨基修饰的荧光SiO2纳米粒子、羧基化荧光SiO2纳米粒子和将羧基化LDS粒子与抗体蛋白的偶联来制造荧光SiO2胶体试剂，制作过程简易可行；利用荧光SiO2胶体试剂与免疫层析技术相结合，制备的检测试纸，可以实现定性检测有色和无色样品，扩大了常规胶体金标记试纸的应用领域。

主权项

荧光SiO2胶体试剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1）制备氨基修饰的荧光SiO2纳米粒子：利用Triton‑X100、环己烷、正己醇和水形成微乳体系的液体，在微乳体系中加入二氯化三联吡啶钌六水合物溶液后搅拌，继续加入正硅酸四乙酯、氨水之后，形成核壳结构，继续加入正硅酸乙酯和3‑氨基丙基三乙氧基硅烷，得到氨基修饰的SiO2纳米粒子溶液，经过破乳、清洗、干燥后得到荧光SiO2纳米粒子；2）SiO2纳米氨基的羧基化：利用N,N‑二甲基甲酰胺对步骤1）中得到的纳米粒子进行清洗、搅拌得到羧基化的荧光SiO2纳米粒子；3）通过羧基化荧光SiO2纳米粒子与抗体蛋白的偶联，得到抗体致敏的荧光SiO2纳米粒子；所述步骤1）的具体步骤如下：1‑1）利用Triton‑X100、环己烷、正己醇和水在搅拌设定时间后形成微乳体系；1‑2）在步骤1‑1）得到的微乳体系中加入浓度为100mg/ml 的[Ru(bpy)3]2+Cl‑2· 6H2O水溶液后，进行搅拌，[Ru(bpy)3]2+Cl‑2· 6H2O水溶液与步骤1‑1）中加入水的体积比是1:2；1‑3）在步骤1‑2）得到的溶液中加入与步骤1‑2）中[Ru(bpy)3]2+Cl‑2· 6H2O 同体积的TEOS后进行搅拌，加入氨水后，在室温条件下，搅拌，使得溶液中形成核壳结构，进行静置；1‑4）向步骤1‑3）中得到的溶液中加入步骤1‑3）中TEOS体积3/5的TEOS和步骤1‑3）中TEOS体积3/5的3‑氨基丙基三乙氧基硅烷，在室温条件下，继续搅拌后，得到氨基修饰的SiO2纳米粒子；1‑5）在步骤1‑4）中得到的溶液中加入丙酮，进行破乳，分别用乙醇和设定pH值的PBS对破乳后的溶液清洗数次，得到纳米粒子，将得到的纳米粒子真空冷冻干燥；所述步骤3）的具体步骤如下：3‑1）取设定质量的EDC，用PBS溶液使之充分溶解，形成I液；3‑2）取设定质量的羧基化的荧光SiO2纳米粒子，用PBS溶液溶解，形成II液；3‑3）取待标记抗体蛋白, 溶于PBS中，形成III液；3‑4）将步骤3‑2）获得的II液和步骤3‑3）获得的III液混合，在磁力搅拌下逐滴加入步骤3‑1）获得的部分I液；3‑5）在室温条件下，对步骤3‑4）获得的溶液在避光条件下，继续逐滴加入余下的I液；3‑6）在4℃的条件下，对步骤3‑5）获得的溶液搅拌；3‑7）在4℃的条件下，对步骤3‑6）获得的溶液静置；3‑8）用设定浓度的PBS溶液对3‑7）获得的物质清洗三次，干燥后，获得抗体致敏的荧光SiO2胶体试剂；所述步骤1‑1）中Triton‑X100、环己烷、正己醇和水的体积比是17.7:75:16:2；所述步骤3‑1）中的EDC的质量与所述步骤 3‑2）中荧光SiO2纳米粒子的质量比是4:1。