[发明专利]一种基于荧光分析的煎炸食品中丙烯酰胺的检测方法

摘要

一种基于荧光分析的煎炸食品中丙烯酰胺的检测方法，涉及煎炸食品检测。1)配制试剂配制100μg/mL丙烯酰胺储备液、0.05g/mL聚合剂溶液、3mM光引发剂、10％荧光增敏剂、5mg/mL荧光胺溶液、0.1M的磷酸盐缓冲溶液；2)检测条件优化，包括pH、聚合剂浓度、TPO浓度、荧光增敏剂浓度、荧光胺浓度的优化；3)丙烯酰胺的聚合及检测。提高了丙烯酰胺转化成聚丙烯酰胺的效率；采用室温光照条件下将丙烯酰胺聚合成聚丙烯酰胺，避免高温反应，提高了方法的安全性及稳定性；利用荧光增敏剂，不仅可以保护荧光胺与聚丙烯酰胺生成的绿色荧光物质，还可以提高荧光强度，增大了方法的灵敏度。

主权项

一种基于荧光分析的煎炸食品中丙烯酰胺的检测方法，其特征在于包括以下步骤：1)配制试剂：配制100μg/mL丙烯酰胺储备液、0.05g/mL聚合剂溶液、3mM光引发剂、10％荧光增敏剂、5mg/mL荧光胺溶液、0.1M的磷酸盐缓冲溶液；所述聚合剂选自过硫酸钾、过硫酸铵、四甲基二乙胺中的一种；所述光引发剂选自(2,4,6‑三甲基苯甲酰基)二苯基氧化膦、2,4,6‑三甲基苯甲酰基苯基膦酸乙酯、1‑羟基环己基苯基甲酮、2‑羟基‑2‑甲基‑1‑苯基丙酮、苯甲酰甲酸甲酯中的一种；所述荧光增敏剂选自曲拉通Tx‑100、十二烷基磺酸钠、环糊精中的一种；2)检测条件优化，包括pH、聚合剂浓度、光引发剂浓度、荧光增敏剂浓度、荧光胺浓度的优化；所述pH的优化方法为：将500μL 100μg/mL的丙烯酰胺溶液中加入到10μL 0.05g/mL聚合剂溶液中,同时加入100μL 2mM TPO溶液，混匀后放到波长为365nm和254nm的紫外灯下照射1h；随后加入200μL不同pH的PBS，接着再加入200μL 0.5mg/mL荧光胺溶液和480μL 10％荧光增敏剂溶液，混合均匀，在激发波长375nm条件下，测定体系在465nm处的荧光强度；所述聚合剂浓度的优化方法为：将500μL 100μg/mL的丙烯酰胺溶液中加入到10μL浓度分别为0.001，0.005，0.01，0.03，0.05mg/mL五个浓度的聚合剂溶液中,同时加入100μL 2mM TPO溶液，混匀后放到波长为365nm和254nm的紫外灯下照射1h；随后加入200μL pH为8.0的PBS，接着再加入200μL 0.5mg/mL荧光胺溶液和480μL 10％荧光增敏剂溶液，混合均匀，在激发波长375nm条件下，测定体系在465nm处的荧光强度；所述光引发剂浓度的优化方法为：将500μL 100μg/mL的丙烯酰胺溶液中加入到10μL0.03mg/mL聚合剂溶液中,同时加入100μL浓度分别为0.1，0.5，1.0，2.0，3.0mM五个浓度的TPO溶液，混匀后放到波长为365nm和254nm的紫外灯下照射1h；随后加入200μL pH为8.0的PBS，接着再加入200μL 0.5mg/mL荧光胺溶液和480μL 10％荧光增敏剂溶液，混合均匀，在激发波长375nm条件下，测定体系在465nm处的荧光强度；所述荧光增敏剂浓度的优化方法为：将500μL 100μg/mL的丙烯酰胺溶液中加入到10μL 0.03mg/mL聚合剂溶液中,同时加入100μL 2mM TPO溶液，混匀后放到波长为365nm和254nm的紫外灯下照射1h；随后加入200μL pH为8.0的PBS，接着再加入200μL 0.5mg/mL荧光胺溶液和480μL浓度分别为0％，8％，10％，15％四个浓度的荧光增敏剂溶液，混合均匀，在激发波长375nm条件下，测定体系在465nm处的荧光强度；所述荧光胺浓度的优化方法为：将500μL 100μg/mL的丙烯酰胺溶液中加入到10μL 0.03mg/mL聚合剂溶液中,同时加入100μL 2mM TPO溶液，混匀后放到波长为365nm和254nm的紫外灯下照射1h；随后加入200μL pH为8.0的PBS，接着再加入200μL浓度分别为0.1，0.3，0.5，1.0，5.0mg/mL五个浓度的荧光胺溶液和480μL 10％荧光增敏剂溶液，混合均匀，在激发波长375nm条件下，测定体系在465nm处的荧光强度；3)丙烯酰胺的聚合及检测，具体方法如下：将500μL不同浓度的丙烯酰胺溶液中加入到10μL聚合剂溶液中,同时加入100μL TPO溶液，混匀后放到波长为365nm和254nm的紫外灯下照射1h；随后加入200μL磷酸盐缓冲溶液PBS，pH 8，接着再加入200μL荧光胺溶液和480μL荧光增敏剂溶液，混合均匀，在激发波长375nm条件下，测定体系在465nm处的荧光强度。