[发明专利]基于Cre/lox系统的无抗性基因染色体整合的表达D-阿洛酮糖3-差向异构酶的重组枯草芽孢杆菌的构建方法在审
| 申请号： | 201510294696.8 | 申请日： | 2015-06-02 |
| 公开（公告）号： | CN104946577A | 公开（公告）日： | 2015-09-30 |
| 发明（设计）人： | 江波;沐万孟;何伟伟;张涛 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/74;C12P19/24;C12P19/02;C12R1/125 |
| 代理公司： | 无锡市大为专利商标事务所(普通合伙) 32104 | 代理人： | 时旭丹;张仕婷 |
| 地址： | 214122 江苏省无锡市滨湖区蠡湖*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 基于Cre/lox系统的无抗性基因染色体整合的表达D-阿洛酮糖3-差向异构酶的重组枯草芽孢杆菌的构建方法，属于酶基因工程技术领域。以整合载体pDGIEF为出发载体，删除原有的壮观霉素(spc)抗生素抗性基因，引入lox71-spc-lox66新的抗生素抗性基因片段，得质粒pDGI-7S6；将ATCC 35704的DPE酶基因，在其上游融合P43启动子构建P43-DPE，将其构建至pDGI-7S6中得pDGI-7S6-P43-DPE；再转化1A751感受态，在淀粉酶同源臂作用下，P43-DPE和lox71-spc-lox66整合至1A751染色体上；利用Cre/lox系统将spc抗性基因敲除，得一株食品级安全的产D-阿洛酮糖3-差向异构酶的1A751/lox-DPE，命名为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）SK38.002，保藏编号：CCTCC NO:M 2015258。发酵液总酶活达到6U/mL，具有重要的工业应用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 cre lox 系统 抗性 基因 染色体 整合 表达 阿洛酮糖 差向异构 重组 枯草 芽孢 | ||
【主权项】：
一株基于Cre/lox系统的无抗性基因染色体整合的表达D‑阿洛酮糖 3‑差向异构酶的重组枯草芽孢杆菌，其组成为1A751/lox‑DPE，分类命名为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）SK38.002，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：M 2015258。
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