[发明专利]一种基于超声破碎的食用菌液体菌种制作方法

摘要

本发明公开了一种基于超声破碎的食用菌液体菌种制作方法，包括将所保藏母种斜面活化，活化菌种转至平板培养，长出菌落后用打孔器于菌落近边缘打孔，挑取琼脂块菌种至液体培养基培养，然后利用超声波细胞破碎仪对培养后的菌种进行破碎，得到含大量菌丝片段的均质化液体菌种，作为液体深层发酵或作为制备原种、栽培种或代料栽培的菌种。均质化液体菌种也可继续扩大培养后再次超声破碎获得更大量液体菌种。本发明所公布的液体菌种制作方法具有制作简便、快速、高效、不易染菌等特点，所制备的菌种具有生长点多、菌种用量少、生长速度快以及便于自动化接种的实现等优点，具有极大的应用前景。

主权项

一种基于超声破碎的食用菌液体菌种制作方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）活化保藏菌种： 保藏的食用菌母种接种至新鲜斜面，25‑27℃培养活化7‑10 d；（2）活化菌种转至马铃薯葡萄糖琼脂平板培养基（PDA）培养， 25‑27℃培养5‑10 d；（3）待长出菌落后用打孔器于菌落近边缘打孔：无菌条件下，用直径0.5‑1 cm 的打孔器于平板中菌落近边缘打孔；（4）挑取打孔后琼脂块菌种至装有液体培养基的摇瓶培养：挑取打孔琼脂块菌种至50 mL 液体培养基摇瓶培养，30℃、160 rev/min 培养5‑10 d；（5）利用超声波细胞破碎仪对培养后的菌种进行破碎，得到菌丝体均质化的液体菌种，从而数量级扩增接种物生长点，作为液体深层发酵或制备原种、栽培种、代料栽培的接种物；利用超声波细胞破碎仪对培养后的菌种直接进行破碎，每次超声10 s、超声6 次，或每次超声20 s、超声3次，共1 min，超声功率250 W，得到含大量菌丝片段的均质化液体菌种；液体菌种接种至装有液体培养基的摇瓶，接种量为2% (v/v)，温度30℃、160 rev/min培养3‑7 d；收集菌丝体和发酵液，用于活性物质提取；或者再次超声破碎，得到的菌种用于扩大液体发酵或作为大量制备原种、栽培种或代料栽培的接种物。