[发明专利]一种Pb2+含量的测定方法

摘要

一种Pb2+含量的测定方法，属于化学发光技术领域，利用末端含富G寡核苷酸链的发卡DNA1修饰磁珠制备DNA1修饰磁珠DNA1‑MB，当含Pb2+样品加入DNA1‑MB中后，形成Pb2+‑G四链体结构；再加入DNA2后，DNA2的5’端与G四链体结构3’端单链部分杂交形成足点域，在足点域的作用下DNA2未杂交的部分与G四链体未杂交部分继续进行杂交形成双链DNA，将Pb2+替换下来进行下一个G四链体结构的形成，如此Pb2+被循环利用，同时将大量的DNA2附着在磁珠上，利用光二极管诱导化学发光原理，利用化学发光仪检测化学发光强度，根据化学发光强度实现对Pb2+的测定。本发明方法简单、成本低、灵敏度高。

主权项

1.一种Pb2+含量的测定方法，其特征是包括以下步骤：1.1 磁珠的前期处理，取10μL链霉亲和素修饰的磁珠至1mL离心管中，并用100μL pH 8.0的Tris‑HCl缓冲溶液清洗两遍；1.2 发卡DNA1的预处理，发卡DNA1在使用之前在95℃孵化2min，并逐步降至室温备用；1.3 发卡DNA1在磁珠表面的固定，将100μL pH 6.8的磷酸缓冲溶液加入到盛有10μL磁珠的1mL离心管中，并加入10μL 1.00×10‑5M生物素修饰的发卡DNA1链，在37℃下振荡反应30min，得发卡DNA1修饰的磁珠，并用磷酸缓冲溶液洗涤3遍，并分散于100μL的磷酸缓冲溶液中；1.4 Pb2+含量的测定，再加入含Pb2+样品，发卡DNA1的发卡结构被打开，并生成Pb2+‑G四链体的稳定结构，再加入标记探针DNA2链后，在足点域作用下，DNA2与G四链体碱基配对，Pb2+‑G四链体结构被破坏，打开G四链体，释放出Pb2+，使Pb2+再与未反应的发卡DNA1作用，使得Pb2+循环利用，同时标记探针DNA2留在磁珠上，通过光二极管诱导化学发光检测化学发光信号，从而实现Pb2+含量的测定；具体步骤为，将100μL含有Pb2+的样品溶液加入到100μL发卡DNA1修饰的磁珠中；37℃下震荡反应30分钟；然后，加入100μL 1.0×10‑5M的FITC标记的DNA2溶液，37℃下震荡4小时，然后磁性分离，弃去清液，将磁珠用磷酸缓冲溶液洗涤两次，然后将所得磁珠分散于100μL磷酸缓冲溶液中；取200μL pH 11.3，浓度为0.01M的鲁米诺溶液于小烧杯中，并加入上述所得的50μL磁珠溶液；打开光二极管电源，照射15秒后关闭电源，然后测定化学发光强度，根据化学发光强度实现对Pb2+的测定；其中，DNA序列为：发卡DNA1：5’‑biotin‑ATCCGATCGGATACCCGGGTGGGTGGGTGGGTATCCGA‑3’；DNA2：5’‑TCGGATACCCACCCACCCACCCG‑FITC‑3’。