[发明专利]外源基因转化浮萍并进行表达的方法

摘要

本发明涉及生物技术领域，尤其是一种将外源基因快速高效转化入浮萍并进行表达的方法。步骤一将外源基因转化至农杆菌中，获得重组农杆菌；然后配制农杆菌重悬液；步骤二在所述浮萍叶状体割划若干处，然后将所述割划后的浮萍叶状体在所述农杆菌重悬液中浸泡10‑15min，通过所述重组农杆菌将所述外源基因转化到所述浮萍叶状体中；然后将所述浮萍叶状体移植入铺有无菌滤纸的共培养基中，室温下避光培养3天以上。最后进行选择性筛选。本发明的转化方法操作方便，转化效率高，大大简化了将外源基因转化到宿主植株浮萍的操作，转化阳性率大大提高。

主权项

一种外源基因转化浮萍并进行表达的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一：将外源基因pcambia‑1300‑GFP双元质粒转化至农杆菌EHA 105中，获得重组农杆菌；然后配制农杆菌重悬液；所述农杆菌重悬液的配制步骤为：挑取重组农杆菌单菌落在YEB固体培养基上活化；活化完成后的重组农杆菌单菌落再接种到YEB液体培养基中，26~30℃生长过夜，获得重组农杆菌菌液；然后按照体积比为1:50~100将所述重组农杆菌菌液接种于含有50 mg/L卡那霉素，10 mg/L利福平和20 mg/L乙酰丁香酮的YEB液体培养基中形成接种液，于26~30℃振摇至使所述接种液在波长为600 nm的吸光度值为1.0；最后将所述接种液重悬于含3%蔗糖，20 mg/L乙酰丁香酮和0.6 M甘露醇的1/2 MS液体培养基中，得到农杆菌重悬液；步骤二：在所述浮萍叶状体区域割划若干处，然后将所述割划后的浮萍叶状体在所述农杆菌重悬液中浸泡10‑15 min，通过所述重组农杆菌将所述外源基因生长到所述浮萍叶状体中；然后将所述浮萍叶状体移植入铺有无菌滤纸的共培养基中，室温下避光培养3天以上；所述共培养基为含3%蔗糖、20 mg/L乙酰丁香酮、0.5 mg/L 6‑苄基嘌呤的1/2 MS固体培养基。