[发明专利]一种镇痛活性多肽的制备方法

摘要

本发明公开了一种具镇痛活性多肽的制备方法，属于基因工程领域；所述制备方法如下根据大肠杆菌密码子使用频率优化美洲商陆抗菌肽PaAMP1基因序列，经化学合成后连入原核表达载体pET‑32a载体，然后将重组质粒导入大肠杆菌Origami（DE3）菌株，经IPTG诱导后，实现重组PaAMP1的高效可溶性表达；采用镍离子亲和层析方法分离纯化重组PaAMP1；本发明通过小鼠醋酸扭体试验首次证实重组PaAMP1具有显著的镇痛活性，在镇痛领域具有潜在的应用价值；由于PaAMP1来源于植物美洲商陆，该材料易于大规模种植，其资源远比海洋芋螺资源丰富，因此，有望从大规模种植的美洲商陆中工业化提取天然的镇痛多肽，满足药物研发及临床需求。

主权项

一种镇痛活性多肽的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：（1）优化植物抗菌肽PaAMP1基因序列；（2）合成优化后的PaAMP1基因，经BamHI/HindIII双酶切后，连入经同样酶切的原核表达载体pET‑32a，得到重组质粒pET‑32a‑PaAMP1，将重组质粒导入宿主菌，得到基因工程菌株；所述优化后的PaAMP1基因的序列为SEQ ID NO.1，其编码的蛋白质序列为SEQ ID NO.2；（3）将得到的基因工程菌株接种于含氨苄青霉素的LB培养基震荡培养，经IPTG诱导后高效表达产生可溶性重组PaAMP1；（4）用镍离子亲和层析纯化后获得重组活性多肽PaAMP1。