[发明专利]一种自体自然杀伤细胞增殖的制备方法及其应用

摘要

本发明提供了一种自体自然杀伤细胞增殖培养的制备方法，其中包括如下特征来自于癌症患者自身的单个核细胞，在使用3‑磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1和CD122转染并稳定表达的K562细胞作为滋养层细胞和白介素2作用下扩增激活获得自然杀伤细胞，自然杀伤细胞增殖倍数达到2500倍以上，CD16+/CD56+表型为90％以上，体内体外试验抗肿瘤具有很强杀伤毒性；本发明还提供了一种含通过上述方法而得到的自体自然杀伤细胞增殖培养的试剂盒，具有高效的抗肿瘤功能。

主权项

一种自体自然杀伤细胞增殖的制备方法，其特征在于，来自于癌症患者自身的单个核细胞，在使用3‑磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1和CD122转染并稳定表达的K562细胞作为滋养层细胞和白介素2作用下扩增激活获得自然杀伤细胞，使自然杀伤细胞得以大量增殖；培养至21天细胞增殖倍数达到2500倍以上，NK细胞数达到3×109以上；CD16+/CD56+表型为90％以上；所述自然杀伤细胞具有抗肿瘤杀伤毒性；所述稳定表达3‑磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1和CD122的K562细胞与来源于患者自体外周血的单个核细胞首先共培养5天，所述K562细胞与淋巴细胞的用量比例为K562细胞数∶淋巴细胞数＝1∶0.1‑1∶10；共培养5天后，将自然杀伤细胞用5mL移液管吸出至新培养瓶中，并补充10‑20mL新鲜细胞培养基，在37℃、5％CO2培养箱中继续培养2‑3天；继续补充20‑40mL新鲜细胞培养基，在37℃、5％CO2培养箱中继续培养2‑3天；然后自然杀伤细胞连续增殖培养到18‑21天，使得NK细胞大量增殖；所述新鲜细胞培养基含50‑2000活性单位/mL白介素2。