[发明专利]一种用珍贵橙色束丝放线菌制备安丝菌素P-3的方法

摘要

本发明涉及一种从珍贵橙色束丝放线菌制备安丝菌素P‑3的方法，包括以下步骤(1)孢子培养将在20％甘油管冷冻保存的束丝放线菌孢子在固体培养基培养皿划线培养，25～30℃培养3～9天，至生长出丰富孢子；(2)种子培养从培养皿刮取孢子，接种于液体种子培养基在25～30℃进行培养30～50h，获得种子液；(3)发酵培养取培养好的种子液接种于液体发酵培养基，于25～30℃发酵培养，溶氧控制20％以上，发酵350～450h。通过本发明方法制得的发酵液中安丝菌素产量高、安丝菌素P‑3所占比例大，节省了生产成本，并有利于后期的纯化过程，适于工业化生产。

主权项

一种从珍贵橙色束丝放线菌制备安丝菌素P‑3的方法，步骤如下：(1)孢子培养：将在20％甘油管冷冻保存的束丝放线菌孢子在固体培养基培养皿划线培养，25～30℃培养3～9天，至生长出丰富孢子；(2)种子培养：从培养皿刮取孢子，接种于液体种子培养基在25～30℃进行培养30～50h，获得种子液；(3)发酵培养：取培养好的种子液接种于液体发酵培养基，于25～30℃发酵培养，溶氧控制20％以上，发酵持续时间350～450h；步骤(1)中所述束丝放线菌为珍贵橙色束丝放线菌ATCC31565(Actinosynnema pretiosum ATCC31565)；所述固体培养基组分为酵母提取物0.1～5％，大豆蛋白胨0.3～1.0％、麦芽浸膏0.1～0.5％，甘油0.5～1.5％，琼脂粉1.5～2.2％，自然pH，均为重量百分比；步骤(2)中所述的液体种子培养基组分为玉米淀粉1～5％，酵母粉0.5～2％，大豆蛋白胨0.5～2％，pH为7.0～8.0，均为重量百分比；步骤(3)中所述的液体发酵培养基组分为玉米淀粉5％，玉米浆干粉2％，热榨豆饼粉2％，葡萄糖0.5％，K2HPO4·3H2O 0.025％，MgSO4·7H2O 0.3％，CaCO3 0.4％，CaCl2 0.1％，异丁醇0.3％，CoCl2·6H2O 0.0005％，FeSO4·7H2O 0.0002％，pH为7.2；均为重量百分比；步骤(3)中当种子液接种液体发酵培养基后开始补加浓度为20～25％的葡萄糖溶液，流速0.4～0.5mL/L/h，发酵至60h后补加含有20～30％的葡萄糖和5～15％热榨豆饼粉，流速0.8～1.2mL/L/h，同时，开始添加异丁醇，添加方式为每24h每升发酵液一次性添加1.8～2.0mL，直至发酵结束。