[发明专利]一种具有高存活率的耐胃酸型地衣芽孢杆菌微胶囊的制备方法

摘要

本发明属于益生菌微胶囊制备技术领域，具体地说是一种具有高存活率的耐胃酸型地衣芽胞杆菌微胶囊的制备方法；本发明对扩大培养过程中的温度、pH和培养基进行优化控制，制备的聚合电解质微胶囊具有蜂窝状的内核和壳状的外层结构，并结合干燥、真空包装保存。生产的地衣芽胞杆菌微胶囊在模拟胃液中，地衣芽孢杆菌具有高存活率、高环境耐受性的优点，该产品不仅可应用于保健食品领域，也可应用于医药领域。本发明的菌株为益生菌，载体材料为自然界中的天然多糖类高分子，绿色、安全、环保。

主权项

一种具有高存活率的耐胃酸型地衣芽孢杆菌微胶囊的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)菌株活化：将地衣芽孢杆菌菌液接种于pH＝6.4‑7.5的液体培养基中，在35‑40℃、160‑280rpm条件下培养10‑18h，进行菌种活化，得到活化种子液；(2)扩大培养：将所述活化种子液按2‑7％的接种量接种于装有pH＝6.4‑7.5的新鲜液体培养基的锥形瓶中，在35‑40℃、160‑280rpm条件下培养2‑6h，得到地衣芽孢杆菌培养物；(3)菌悬液制备：将所述地衣芽孢杆菌培养物于4℃、3000‑8000rpm转速下离心10‑40min，去除上清液，获得沉淀菌体；按体积比1：4‑8向所述沉淀菌体中加入无菌水、振荡混均，再于4℃、3000‑8000rpm转速下离心10‑40min，去除上清液，反复洗涤2‑3次，最后用无菌水悬浮菌体，得到活菌数≥109cfu/mL的地衣芽孢杆菌菌悬液；(4)内水相菌体悬浮液制备：将所述地衣芽孢杆菌菌悬液加入到经无菌处理的聚阴离子电解质溶液中，无菌条件下振荡混均，得到内水相菌体悬浮液，在所述内水相菌体悬浮液中聚阴离子电解质浓度为0.01‑0.04g/mL；所述的聚阴离子电解质溶液为海藻酸钠溶液；(5)外水相A液、外水相B液制备：配制经无菌处理的浓度为0.04‑0.1g/mL的小分子溶液作为外水相A液备用；配制经无菌处理的浓度为0.005‑0.03g/mL的聚阳离子电解质溶液作为外水相B液备用；所述的聚阳离子电解质溶液为氯化壳聚糖溶液；(6)地衣芽孢杆菌湿微胶囊的制备：将1‑5mL的内水相菌体悬浮液以450‑850μL·min‑1的流速注入到15‑60mL外水相A液中，在200‑500rpm转速下保持外水相的低速流动，经室温固化反应5‑35min后，收集载菌微胶囊，用无菌水洗涤后缓慢加入到15‑60mL外水相B液中，在200‑500rpm转速下保持外水相的低速流动，室温包衣反应5‑35min后，收集产物并用无菌水均匀洗涤，得到耐胃酸型地衣芽孢杆菌湿微胶囊；(7)干燥保藏：将所述耐胃酸型地衣芽孢杆菌湿微胶囊低温真空干燥后，在无菌条件下进行真空包装，即得到干燥的耐胃酸型地衣芽孢杆菌微胶囊。