[发明专利]一种MC3T3-E1成骨细胞氧化应激测试方法

摘要

本发明涉及一种氧化应激测试方法，特别涉及一种成骨细胞氧化应激测试方法。首先将成骨细胞MC3T3-E1进行培养和诱导分化；取生长状态良好的MC3T3-E1细胞悬液接种于六孔板中，培养液预培养24小时使细胞贴壁；取浓度为0.1-1mmol/L的成骨细胞液，培养20-28小时后加入浓度为0.1-1mmol/L的过氧化氢溶液；去除原有培养液，用正常培养液清洗2-4次后再用PBS清洗1-3次，每孔加入10ul的CCK-8，37℃避光孵育3小时；在450nm波长处，测定各孔光吸收值即可。本测试方法有效测试出氧化应激刺激能引起细胞的死亡，并损害成骨细胞的正常功能，抑制成骨细胞的分化。

主权项

一种MC3T3‑E1成骨细胞氧化应激测试方法，其步骤包括，（1）将α‑MEM培养液37‑40℃预热20‑25分钟；然后将α‑MEM培养液重悬MC3T3‑E1细胞，均匀，接种于培养皿中，摇匀，放入37℃、5%CO₂培养箱中进行培养；（2）每2‑3天换一次液，3‑5天后细胞达到80‑90%汇合时弃去原培养液，胎牛血清洗净后，加入1ml浓度为0.25%Trypsin‑EDTA放入37℃、5%CO2培养箱中1‑2分钟，加入2ml培液终止消化，制成MC3T3‑E1细胞悬液；（3）取生长状态良好的MC3T3‑E1细胞悬液接种于六孔板中，α‑MEM培养液预培养24小时使细胞贴壁；（4）取步骤（3）中的浓度为0.1‑1.0mmol/L的成骨细胞液，培养20‑28小时后加入浓度为0.1‑1.0mmol/L的过氧化氢溶液；（5）去除原有α‑MEM培养液，用正常α‑MEM培养液清洗2‑4次后再用PBS清洗1‑3次，每孔加入10ul的CCK‑8毒性/增殖检测试剂，37℃避光孵育3小时；（6）在450nm波长处，测定各孔光吸收值即可。