[发明专利]一种CRISPR/Cas9单一转录单元定向修饰骨架载体及其应用有效
| 申请号： | 201510397341.1 | 申请日： | 2015-07-08 |
| 公开（公告）号： | CN105132451B | 公开（公告）日： | 2019-07-23 |
| 发明（设计）人： | 张勇;郑雪莲;邓科君;唐旭;章登位 | 申请（专利权）人： | 电子科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/79 | 分类号： | C12N15/79;C12N15/66 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 611731 四川省成*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种CRISPR/Cas9单一转录单元定向修饰骨架载体及其应用。本发明要解决的技术问题是：现有CRISPR/Cas9基因组编辑体系物种通用性低及难以实现Cas9蛋白表达及gRNA转录的协同。本发明的技术方案是：构建CRISPR/Cas9单一转录单元骨架载体，由一个启动子来调控Cas9和向导RNA核心单元的转录。本发明还提供了采用所述的CRISPR/Cas9单一转录单元骨架载体来构建针对目标位点特异性修饰Cas9‑gRNA重组载体的方法。本发明提供了一种高效的CRISPR/Cas9单一转录单元骨架载体，可以有效实现基于Pol II型启动子驱动的Cas9及gRNA单元的协同转录，针对多种真核生物进行简单、快捷、高效的基因组定向遗传修饰。 | ||
| 搜索关键词： | 骨架载体 转录单元 转录 定向修饰 基因组 启动子 构建 协同 基因工程技术 特异性修饰 编辑体系 蛋白表达 核心单元 遗传修饰 有效实现 真核生物 重组载体 目标位 应用 物种 驱动 调控 | ||
【主权项】：
1.CRISPR/Cas9单一转录单元骨架载体，由一个启动子来调控Cas9和向导RNA核心单元的转录，所述的启动子为PolⅡ型启动子，所述的核心单元从5’到3’方向依次为Cas9 ORF‑Poly A‑RZ cleavage site‑gRNA cloning scaffold‑RZ cleavage site‑RZ，且gRNA cloning scaffold至少为一个，gRNA cloning scaffold之间为RZ cleavage site；其中，Cas9ORF即Cas9蛋白编码框，RZ cleavage site即核酶识别切割位点，gRNA cloning scaffold即gRNA克隆及转录单元，RZ即核酶全酶。
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