[发明专利]一种RAPD标记竹节参及其近缘植物的品种鉴别的方法

摘要

本发明通过RAPD标记技术与人工绘制品种鉴定图（MCID）法相结合的方法，实现竹节参及其近缘人参属植物（人参、西洋参、三七以及竹节参变种狭叶竹节参、羽叶三七、珠子参）的快速鉴别。采用改良的CTAB法从叶片中提取竹节参及其近缘植物总DNA，从16条随机引物中筛选出能稳定扩增并且具有特异性条带的4条引物构建DNA指纹图谱，共扩增出46条条带，其中多态性条带42条，多态性比率为91.30%。根据特异性条带的有无，将竹节参及其近缘植物一一鉴别区分开，绘制图谱关系分析图，构成人工绘制品种鉴定图。该方法快速简单，结果直观可靠，为竹节参及近缘品种的初步鉴别提供了一种有效可行的方法。

主权项

1.一种RAPD标记竹节参及其近缘植物的品种鉴别的方法，可同时鉴别人参，西洋参，三七，珠子参，羽叶三七，竹节参，狭叶竹节参，其特征在于，包括如下步骤：DNA的提取 常规提取竹节参及其近缘植物的叶片DNA，鉴定浓度和纯度；PCR反应体系 将上述得到的DNA在PCR反应液下进行扩增反应，其DNA的扩增程序为94℃预变性5min；94℃变性45s，36℃退火60s，72℃延伸90s，循环39次；72℃补充延伸7min，确定得到稳定的扩增产物，即为PCR反应产物，同时PCR扩增反应均设不含模板DNA的空白对照；RAPD引物筛选 收集RAPD引物，应用软件比对后筛选随机引物，再将随机引物经过RAPD的PCR反应，进行电泳，凝胶分析系统检测照相，筛选的RAPD引物包括F02 5’→3’ GAGGATCCCT、I13 5’→3’ CTCTCCGCCA、H03 5’→3’ AGACGTCCAC、F01 5’→3’ ACGGATCCTG；RAPD‑PCR检测竹节参及其近缘植物中DNA扩增产物 应用筛选到的引物，通过优化的PCR反应条件，检测竹节参及其近缘植物中DNA的RAPD‑PCR产物，并进行带型分析；数据分析 根据随机引物PCR扩增电泳图谱，将相同的分子量片段处产生特异性条带的有无进行统计分析，利用特异性条带的有无可将竹节参及其近缘植物分组，使用多个随机引物的分组结果的组合，可以将竹节参及其近缘植物一一区分开来；鉴别人参的带型为F02引物扩增的1100bp(+)700bp(‑)和I13引物扩增的800bp(+)；鉴别西洋参的带型为F02引物扩增的1100bp(+)700bp(‑)和I13引物扩增的800bp(‑)；鉴别竹节参的带型为F02引物扩增的1100bp(‑)700bp(+)，H03引物扩增的300bp(+)以及I13引物扩增的450bp(+)；鉴别狭叶竹节参的带型为F02引物扩增的1100bp(‑)700bp(+)，H03引物扩增的300bp(‑)以及F01引物扩增的500bp(+)；鉴别羽叶三七的带型为F02引物扩增的1100bp(‑)700bp(+)，H03引物扩增的300bp(‑)以及F01引物扩增的500bp(‑)；鉴别珠子参的带型为F02引物扩增的1100bp(‑)700bp(+)，H03引物扩增的300bp(+)以及I13引物扩增的450bp(‑)；鉴别三七的带型为F02引物扩增的1100bp(‑)700bp(‑)。