[发明专利]虾仁下脚料锌螯合肽的制备方法

摘要

本发明涉及一种虾仁下脚料锌螯合肽的制备方法，具体讲是以虾仁加工下脚料为原料，采用酸法提取胶原蛋白，利用胃蛋白酶和胰蛋白酶对胶原蛋白进行酶解，采用超滤、大孔树脂柱层析、凝胶柱层析和反相高效液相色谱分离纯化得到锌螯合胶原肽。锌螯合胶原肽由于其独特的螯合和转运机制，吸收利用度高，又可同时补充多肽/氨基酸和锌，是一种理想的补锌物质。

主权项

虾仁下脚料锌螯合肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1）虾仁加工下脚料蛋白酶解物的制备：将虾仁加工下脚料用组织捣碎机粉碎，按照料液比1 g：4～5 mL加入磷酸盐缓冲液，于45～50℃下于超声功率400～500W下超声60～90 min，然后加入中性蛋白酶，于45～50℃保温2～3 h后，温度升至90～95℃并保持10～15 min；溶液温度降至37～40℃，pH调至 7.5～8.0，加入胰蛋白酶，保温2～3 h后，温度升至90～95℃并保持10～15 min后，于9 000 ～10 000g离心15～20 min，得上清液，即虾仁加工下脚料蛋白酶解物；所述的虾仁加工下脚料含有虾头或虾壳；所述的磷酸盐缓冲液为0.2 mol/L，pH 6.5～7.5；2）虾仁加工下脚料锌螯合肽的制备：将制备的蛋白酶解物采用3 kDa超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于3 kDa部分，得超滤酶解液，超滤酶解液按照体积比加入到装有8～10倍NKA‑9大孔树脂的层析柱中，用2～3倍柱体积水洗脱除去杂质，然后用3～5倍柱体积的30%和60%乙醇进行洗脱，收集60%乙醇洗脱液，于50 ℃以下低压旋蒸除去乙醇、冷冻干燥得多肽混合物，多肽混合物依次经固定化锌离子层析柱层析、凝胶柱层析和反相高效液相色谱纯化制备氨基酸序列为Trp‑Gly‑Phe‑Thr‑Cys‑Trp‑Pro‑Met、ESI/MS检测分子量为1027.20 Da的虾仁加工下脚料锌螯合肽。