[发明专利]直接重编程小鼠肝细胞为胰岛β细胞的方法及应用有效
| 申请号： | 201510400183.0 | 申请日： | 2015-07-09 |
| 公开（公告）号： | CN105002142B | 公开（公告）日： | 2019-04-05 |
| 发明（设计）人： | 李富荣;齐晖;邓春艳;张田田 | 申请（专利权）人： | 深圳市人民医院 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N5/071;C07K14/62;A61K38/28;A61K35/39;A61P3/10 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅;白艳 |
| 地址： | 518020 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了直接重编程小鼠肝细胞为胰岛β细胞的方法及应用。本发明提供了一种使肝细胞重编程为胰岛β细胞的方法，包括如下步骤：将Pdx1蛋白编码基因、Pax4蛋白编码基因和Neurod1蛋白编码基因转染离体肝脏细胞，得到胰岛β细胞；本发明的优势在于，第一，采用非病毒EntransterTM‑D转染试剂，不但具有较高的转染效率，同时大大提高了直接重编程过程中转染的安全性。第二，根据文献的报道，筛选出适用于直接重编程为胰岛β细胞新的最佳转染组合Pdx1、Pax4、Neurod1。第三，根据各个转录因子发挥作用的先后顺序，筛选出最佳转染时段24h，从而提高了直接重编程为胰岛细胞的成熟度问题，本研究中重编程效率达23％。 | ||
| 搜索关键词： | 重编程 胰岛β细胞 蛋白编码基因 转染 小鼠肝细胞 筛选 重编程效率 离体肝脏 胰岛细胞 转录因子 转染试剂 转染效率 成熟度 非病毒 肝细胞 应用 细胞 研究 | ||
【主权项】：
1.一种使离体成体细胞重编程为胰岛β细胞的方法，包括如下步骤：将Pdx1蛋白编码基因、Pax4蛋白编码基因和Neurod1蛋白编码基因转染离体肝脏细胞，得到胰岛β细胞；所述Pdx1蛋白的氨基酸序列为序列6；所述Pax4蛋白的氨基酸序列为序列7；所述Neurod1蛋白的氨基酸序列为序列8；所述Pdx1蛋白编码基因、所述Pax4蛋白编码基因和所述Neurod1蛋白编码基因的转染顺序依次为所述Pdx1蛋白编码基因、所述Pax4蛋白编码基因和所述Neurod1蛋白编码基因；其转染间隔时间均为24h。
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