[发明专利]一种用于确定小麦黑穗菌(Tilletia controversa Kühn)侵染小麦组织的染色方法有效
| 申请号： | 201510405988.4 | 申请日： | 2015-07-10 |
| 公开（公告）号： | CN105043842B | 公开（公告）日： | 2018-11-23 |
| 发明（设计）人： | 高利;蔚慧欣;陈万权;刘太国;刘博 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号： | G01N1/30 | 分类号： | G01N1/30;G01N21/64 |
| 代理公司： | 北京海虹嘉诚知识产权代理有限公司 11129 | 代理人： | 吴泳历 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种用于确定小麦黑穗菌(Tilletia controversa Kühn)侵染小麦组织的染色方法，属于真菌染色技术领域。所述染色方法包括如下步骤：(1)固定：取不同生长时期的小麦组织样品，在无水乙醇固定液浸泡不少于24h；(2)染色：将样品先置于含10μg/ml Propidium Idodide和0.02％Tween20的A染色液中浸泡15min,然后置于20μg/ml WGA‑AF488的B染色液中20min，最后用1×PBS pH 7.4冲洗；(3)将处理后样品置于载玻片上加盖玻片倒置后在激光共聚焦显微镜下观察是否有菌丝侵染。同时，本发明还提供了基于所述染色方法的用于确定小麦黑穗菌侵染小麦组织的试剂盒。采用所述染色方法和试剂盒对小麦组织进行染色，实现在任意生长阶段的各种小麦组织中获得较好的黑穂菌染色效果并确认该组织对应的小麦植株是否被黑穂菌侵染，具有操作简单、便捷、有效、限制少、效果好等特点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 用于 确定 小麦 黑穗菌 tilletia controversa hn 侵染 组织 染色 | ||
【主权项】：
1.一种用于确定小麦黑穗菌(Tilletia controversa Kühn) 侵染任一生长时期的小麦组织的染色方法，包括如下步骤：（1）固定：取不同生长时期的小麦组织样品，在无水乙醇固定液浸泡不少于24h；（2）染色：将样品先置于含10 µg/ml Propidium Idodide和0.02% Tween20的A染色液中浸泡15min, 然后置于20 µg/ml WGA‑AF 488的B染色液中 20 min，最后用 1× PBS pH 7.4冲洗；（3）将处理后样品置于载玻片上加盖玻片倒置后在激光共聚焦显微镜下观察是否有菌丝侵染；所述小麦组织样品指叶片、茎秆、花药或子房。
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